耳蜗内caspase介导的细胞凋亡作用于A/J小鼠早期的听力减退

发布时间：2021-08-30 02:27

　　目的：利用电生理学、分子生物学以及形态学等技术,连续动态观察增龄性耳聋发生过程中,耳蜗的功能、形态、结构等特征变化。观察A/J小鼠耳蜗内细胞凋亡相关基因的转录和表达水平,并通过下调HEI-OC1细胞内Cdh23和Cs基因的水平,验证在体实验中细胞内分子变化,分析增龄性聋发生的相关机制。给予抗凋亡药物治疗后,观察其疗效。方法：本实验共应用137只B6小鼠和157只A/J小鼠。①分别在3周、4周、10周、12周、28周和42周时从两组小鼠中各随机抽取5-10只小鼠进行听觉诱发脑干电位（ABR）和畸变产物耳声发射（DPOAE）检测。②分别取2周、4周、10周和46周的A/J小鼠和B6小鼠,分离耳蜗、石蜡包埋、切片并行HE染色和caspase-3的荧光免疫组化检测。③在3周、10周、16周和28周龄时,取两组小鼠各4只,行基底膜铺片观察耳蜗毛细胞丢失情况。④取2周和8周龄的A/J小鼠和B6小鼠各5只,取内耳,通过提取总RNA和实时定量PCR技术检测两种小鼠耳蜗内细胞凋亡相关基因转录水平的差异。⑤对内耳细胞株HEI-OC1细胞进行shRNA转染,分别下调Cs、Cdh23基因或共同Cs和Cdh23... 

【文章来源】：滨州医学院山东省

【文章页数】：53 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１?Ａ／Ｊ小鼠表型特征的动态观察（ａ）基于Ｃｓ基因突变的Ａ／Ｊ小鼠基因分型??方法的建立：Ｃｓ基因ＰＣＲ产物经Ｎｌａ?ＩＩＩ限制性内切酶剪切后的２．?５％琼脂糖凝胶??

毛细胞的损伤主要表现为毛细胞的丢失和细胞形态异常。Ｂ６小鼠在３周龄、??１０周龄和１６周龄都表现出正常的毛细胞形态和规律的静纤毛束排列，当到２８周??龄时，低回毛细胞出现丢失和排列异常（图２?（ａ））。然而，与同龄的Ｂ６小鼠相比，??Ａ／Ｊ小鼠耳蜗低回的外毛细胞丢失、内毛细胞形态与排列异常在３周龄时已非常明??显。图２?（ｂ）显示了我们对Ａ／Ｊ小鼠和Ｂ６小鼠的低、中、顶回耳蜗外毛细胞的观??察结果。总体来说，从３周龄到２８周龄，从耳蜗低回到顶回Ａ／Ｊ小鼠的外毛细胞??丢失都比同龄的Ｂ６小鼠更为严重。??ａ?ｂ???目６?ｉＰａｓａｌ?ｔｕｒｎｓ）?Ａ／Ｊ?ｉｂａｓａｌ?ｔｕｒｎｓ）?巧?ｉ??＾ＩＩ’?．Ｉ．?ＩＩ’ｌｏ］?■■?４??靈；施：：：：‘：：＾＾３?：１＾Ｊ－?Ｐ?：Ｌ?Ｊ１??ｊＪＨＢＢＳＥＳｇｓａ＾＾３?＊ｐ？?知?ＭＷ．??ｉｈｌ－?Ｉ?＾：ｒ；?Ｉ?Ｉ??２８Ｗ?圓顯?ｐ?ｐ；山１４??图２．?Ｂ６小鼠和小鼠耳蜗中外毛细胞的丢失（ａ）显示了对ＶＪ和Ｂ６两??种小鼠耳蜗底回毛细胞丢失的动态观察：所显示的困片为耳蜗底回的组织通过鬼??笔环肤染色所得。在（ａ）中，与左侧的Ｂ６小鼠相比，右侧的Ａ／Ｊ小鼠在３周龄??即表现出外毛细胞丢失和内毛细胞巧态、排列异常。在小鼠１０周Ｗ及更大年??龄时均表现出更严重的内外毛细胞损害。Ｂ６小鼠，尤其是２８周龄的Ｂ６小鼠也表??现出了毛细胞的丢失和非正常排列。比例尺为５０叫１。化）对鬼笔环肤染色后的组??织中的外毛细胞进行计数处理。总的来说，两种小鼠外毛细胞的丢失均是从底回??逐渐发展到顶回的。两者相比

周龄（９７９?＋?３６７?ＶＳ．?１２６８?＋?３３１?巧日?４６?周龄（５６１?±２２８?ＶＳ．５７３＋２３１）时两者没有统计??学差异（ｐ＞０．０５）。通过对标本进行肥染色，我们也看到了?Ａ／Ｊ小鼠早期耳蜗内??渐进性毛细胞丢失（图３?（ｂ））。而且，Ａ／Ｊ小鼠的血管纹相对狭窄（图３?（Ｃ））。??在２周龄、４周龄、１０周龄和４６周龄，Ａ／Ｊ小鼠耳蜗低回血管纹的平均厚度（Ｐｍ）??分别是１６．２±２，１８．３＋２．５，?２１．５±?１．１，和１３．８?＋?２，而相应年龄的Ｂ６小鼠低回血??管纹平均厚度（ｕｍ）则分别为２０?＋?２，?２１．６＋２．８，２４．５?＋?１．５，和１６．６＋２．２。通??过统计，两者仅在２周龄时有明显统计学差异。＜０．０５）。而在每个时间点，这两??种小鼠的耳蜗中回的螺旋神经节细胞密度和血管纹厚度并没有明显统计学差异??（数据未显示）。??ａ?２Ｗ?４Ｗ?１０Ｗ?４６Ｗ??化靜圓??Ｗ嗎哪｜？擊纖瀑??＞隊碼》｜麵一肺缉??？Ｊ?Ｃ?２Ｗ?４Ｗ?１０Ｗ?４６Ｗ??Ｉｆｆ??图３．?小鼠和Ｂ６小鼠耳蜗组织肥染包后的动态病理观察（ａ）为螺旋神??经节细胞（ＳＧＮｓ）的病理学变化。直到４６周龄Ｂ６小鼠都表现出正常的细胞密度，??但是，如困中画圈区域所示，Ａ／Ｊ小鼠的螺旋神经节细胞（ＳＧＮｓ）从４周龄即表现??２５??


本文编号：3371874