PinX1基因靶向端粒酶诱导鼻咽癌细胞自噬效应的实验研究
发布时间：2021-10-20 09:52
第一部分PinX1基因调控端粒酶活性对鼻咽癌细胞自噬效应的影响目的:探究PinX1靶向端粒酶对鼻咽癌细胞自噬效应及增殖的影响。方法:通过qPCR和Western blot监测CNE2、6-10B细胞系中PinX1的表达。低表达细胞系转染PinX1过表达质粒及空载质粒并分组,RT-PCR监测各组hTERT mRNA表达,Western blot和免疫荧光监测自噬。CCK-8、transwell小室监测细胞增殖、迁移和侵袭能力,流式细胞术分析细胞周期和细胞凋亡。结果:1.PinX1在CNE2细胞中低表达,在6-10B细胞中高表达。2.CNE2细胞中导入PinX1过表达质粒后,hTERT表达降低。3.CNE2细胞中LC3Ⅰ、P62表达较高,LC3Ⅱ、Beclin1表达较低,自噬流形成较弱,自噬水平较低。细胞的增殖、侵袭迁徙能力较强。4.CNE2细胞中PinX1过表达后LC3Ⅰ、P62表达降低,LC3Ⅱ、Beclin1表达升高,自噬流形成增强,自噬水平增高。细胞的增殖、侵袭和迁徙能力均降低,细胞周期阻滞在G0/G1期,凋亡指数增加。结论:CNE2鼻咽癌细胞自噬表达较低,加入PinX1靶向端粒酶...
【文章来源】：南方医科大学广东省
【文章页数】：86 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－３?Ａ．?ＰｉｎＸｌ基因ＰＣＲ产物电泳图Ｂ．?ＰＩＮＸ丨基因双酶切电泳图??
?第一部分?ＰｉｎＸｌ基因调控端粒酶活性对鼻咽癌细胞自噬效应的影响???３．３?ｑＰＣＲ、Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ监测ＰｉｎＸｌ在各组ＣＮＥ２鼻咽癌细胞株的表达情况??对各组ＣＮＥ２鼻咽癌细胞传代培养后，使用ｑＰＣＲ检测各组鼻咽癌细胞??ＰｉｎＸｌ?ｍＲＮＡ的表达量。如图１－４所示，发现Ｃ组（Ｏｖｅｒ－ＰｉｎＸ?１组）的ＰｉｎＸｌ??表达量显著高于其他两组（Ｆ＝１２５．８，?／Ｍ）．０００１）。其中，Ｃ组（Ｏｖｅｒ－ＰｉｎＸｌ??组）中ＰｉｎＸｌ的表达量是Ａ组（Ｂｌａｎｋ组）的２．６９０±?０．０．１２６倍，差异具有??统计学意义（尸＝〇．〇〇〇３?＜０．００１）?；?Ｃ组（Ｏｖｅｒ－ＰｉｎＸ?１组）中ＰｉｎＸｌ的表达??量是Ｂ组（Ｖｅｃｔｏｒ组）的２．７７９±０．１４０倍，差异具有统计学意义（Ｐ＝０．０００３??＜０．００１）。通过Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ进一步验证Ａ、Ｂ、Ｃ组中ＰｉｎＸｌ的表达情况。??如图１－４所示，转染ＰｉｎＸｌ过表达质粒后，Ｃ组中ＰｉｎＸｌ的表达量明显高于??Ａ组和Ｂ组。??４，?木？?＋??Ｉ?Ｉ?Ｂ３?Ａ：Ｂｌａｎｋ??￣?本＋木??Ｉ?３－?１?ＩＬ?＝?Ｂ：Ｖｅｃｔｏｒ??￡?ｒ?ｋｓＵｍ?ｎ?Ｃ?０ｖｅｒ－ＰｉｎＸ１??Ｉ？?２－?國??１：１＿?＿?＿??Ａ：Ｂｌａｎｋ?Ｂ：Ｖｅｃｔｏｒ?Ｃ：０ｖｅｒ－ＰｉｎＸ１??图１－４?ｑＰＣＲ法监测ＰｉｎＸｌ在各组ＣＮＥ２鼻咽癌细胞株的表达（ｎ＝３，＊＊＊Ｐ＜０．００１）??Ｆｉｇｕｒｅ?１－４?ｔｈｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ＰｉｎＸｌ?ｉｎ?ＣＮＥ２?ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ?ｃａｒｃｉｎｏｍａ?ｃｅｌｌ?
?硕士学位论文???３．６?Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ及免疫焚光监测自嗤表达情况??利用Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ检测Ａ、Ｂ、Ｃ三组细胞中自噬相关调控蛋白ＬＣ３Ｉ、ＬＣ３ＩＩ、??ｐ６２和Ｂｅｃｌｉｎ－１的表达情况，如图１－８所示。发现在Ｃ组（Ｏｖｅｒ－ＰｉｎＸ］组）中，??自噬相关蛋白ＬＣ３Ｉ、Ｐ６２的表达量显著降低，ＬＣ３ＩＩ、Ｂｅｄｉｎｌ的表达量显著增高，??说明ＰｉｎＸｌ过表达时，自噬效应增强。并进一步通过免疫荧光监测自噬小体的??形成，如图１－９所示，发现Ｃ组（Ｏｖｅｒ－ＰｉｎＸｌ组）鼻咽癌细胞荧光的强度和丰??度显著高于其他两组，自噬流形成增强，自噬效应增强，结果与Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ法??检测结果相一致。??ＡＢＣ??ＬＣ３Ｉ?？■■■？??ＬＣ３ＩＩ?一、－?ｍａｒｎｒｎｍｍ＇??Ｐ６２??Ｂｅｅ??ｇａｐｄｈ?命??Ａ：Ｂｌａｎｋ?组，Ｂ：?Ｖｅｃｔｏｒ?组，Ｃ：Ｏｖｅｒ－ＰｉｎＸ?１?组??图１－８?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ监测自噬相关调控蛋白ＬＣ３Ｉ、ＬＣ３ＩＩ、ｐ６２和Ｂｅｃｌｉｎ－１在各组鼻咽??癌细胞株的表达??Ｆｉｇｕｒｅ?１－８?Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ａｕｔｏｐｈａｇｙ－ｒｅｌａｔｅｄ?ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ?ｐｒｏｔｅｉｎｓ?ＬＣ３Ｉ，?ＬＣ３ＩＩ?＞?Ｐ６２?ａｎｄ?Ｂｅｃｌｉｎ－１?ｉｎ??ｅａｃｈ?ｇｒｏｕｐ?ｂｙ?ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ??３１??
【参考文献】：
期刊论文
[1]端粒酶检测新方法研究进展[J]. 孙丽芳,杨海堂,卫伟. 分析测试学报. 2019(10)
[2]膀胱癌组织中PVRL4、NF-κB p65、E-cadherin的表达变化及意义[J]. 杜刚,黄瑛. 山东医药. 2019(28)
[3]PinX1对食管癌细胞放射敏感性及活性氧水平的影响研究[J]. 刘杨,蒋月,毛荣虎,卢令聪,杨原源. 中华放射医学与防护杂志. 2019 (01)
[4]PI3K抑制剂抗肿瘤研究进展[J]. 蔡田恬,赵敏,王建平. 浙江中西医结合杂志. 2018(08)
[5]肿瘤发展过程中自噬与凋亡的相互作用[J]. 阚月一,王娅杰,李琦,李玉洁,杨庆,翁小刚,陈颖,蔡维艳,朱晓新. 中国比较医学杂志. 2018(02)
[6]自噬与鼻咽癌放疗研究进展[J]. 杨熙宇,赵国旗. 辐射研究与辐射工艺学报. 2017(05)
[7]细胞自噬与凋亡关系的分子机制研究进展[J]. 韩姣,曾凡军,陈世雄,龚正,龚亮,行妍妍,覃黎葵. 海南医学. 2016(04)
[8]沉默NF-κB p65基因可抑制鼻咽癌CNE-2干细胞的增殖和迁移并促进凋亡[J]. 吴顺龙,李亚军,胡瑶瑶,张娜,刘双,王颖,李少林. 肿瘤. 2016(02)
[9]自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤增强鼻咽癌细胞对放射和化学治疗的敏感性[J]. 宋乐乐,马琳艳,陈根德,黄莹莹,孙小锦,蒋琛琛,刘浩. 中南大学学报(医学版). 2016(01)
[10]PinX1基因对鼻咽癌细胞顺铂化疗敏感性的影响及其机制[J]. 申聪香,刘艳慧,文忠,杨柯柯,李冠雪,张沈华,张鑫雨. 中华医学杂志. 2015 (24)
本文编号：3446695
【文章来源】：南方医科大学广东省
【文章页数】：86 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－３?Ａ．?ＰｉｎＸｌ基因ＰＣＲ产物电泳图Ｂ．?ＰＩＮＸ丨基因双酶切电泳图??
?第一部分?ＰｉｎＸｌ基因调控端粒酶活性对鼻咽癌细胞自噬效应的影响???３．３?ｑＰＣＲ、Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ监测ＰｉｎＸｌ在各组ＣＮＥ２鼻咽癌细胞株的表达情况??对各组ＣＮＥ２鼻咽癌细胞传代培养后，使用ｑＰＣＲ检测各组鼻咽癌细胞??ＰｉｎＸｌ?ｍＲＮＡ的表达量。如图１－４所示，发现Ｃ组（Ｏｖｅｒ－ＰｉｎＸ?１组）的ＰｉｎＸｌ??表达量显著高于其他两组（Ｆ＝１２５．８，?／Ｍ）．０００１）。其中，Ｃ组（Ｏｖｅｒ－ＰｉｎＸｌ??组）中ＰｉｎＸｌ的表达量是Ａ组（Ｂｌａｎｋ组）的２．６９０±?０．０．１２６倍，差异具有??统计学意义（尸＝〇．〇〇〇３?＜０．００１）?；?Ｃ组（Ｏｖｅｒ－ＰｉｎＸ?１组）中ＰｉｎＸｌ的表达??量是Ｂ组（Ｖｅｃｔｏｒ组）的２．７７９±０．１４０倍，差异具有统计学意义（Ｐ＝０．０００３??＜０．００１）。通过Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ进一步验证Ａ、Ｂ、Ｃ组中ＰｉｎＸｌ的表达情况。??如图１－４所示，转染ＰｉｎＸｌ过表达质粒后，Ｃ组中ＰｉｎＸｌ的表达量明显高于??Ａ组和Ｂ组。??４，?木？?＋??Ｉ?Ｉ?Ｂ３?Ａ：Ｂｌａｎｋ??￣?本＋木??Ｉ?３－?１?ＩＬ?＝?Ｂ：Ｖｅｃｔｏｒ??￡?ｒ?ｋｓＵｍ?ｎ?Ｃ?０ｖｅｒ－ＰｉｎＸ１??Ｉ？?２－?國??１：１＿?＿?＿??Ａ：Ｂｌａｎｋ?Ｂ：Ｖｅｃｔｏｒ?Ｃ：０ｖｅｒ－ＰｉｎＸ１??图１－４?ｑＰＣＲ法监测ＰｉｎＸｌ在各组ＣＮＥ２鼻咽癌细胞株的表达（ｎ＝３，＊＊＊Ｐ＜０．００１）??Ｆｉｇｕｒｅ?１－４?ｔｈｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ＰｉｎＸｌ?ｉｎ?ＣＮＥ２?ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ?ｃａｒｃｉｎｏｍａ?ｃｅｌｌ?
?硕士学位论文???３．６?Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ及免疫焚光监测自嗤表达情况??利用Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ检测Ａ、Ｂ、Ｃ三组细胞中自噬相关调控蛋白ＬＣ３Ｉ、ＬＣ３ＩＩ、??ｐ６２和Ｂｅｃｌｉｎ－１的表达情况，如图１－８所示。发现在Ｃ组（Ｏｖｅｒ－ＰｉｎＸ］组）中，??自噬相关蛋白ＬＣ３Ｉ、Ｐ６２的表达量显著降低，ＬＣ３ＩＩ、Ｂｅｄｉｎｌ的表达量显著增高，??说明ＰｉｎＸｌ过表达时，自噬效应增强。并进一步通过免疫荧光监测自噬小体的??形成，如图１－９所示，发现Ｃ组（Ｏｖｅｒ－ＰｉｎＸｌ组）鼻咽癌细胞荧光的强度和丰??度显著高于其他两组，自噬流形成增强，自噬效应增强，结果与Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ法??检测结果相一致。??ＡＢＣ??ＬＣ３Ｉ?？■■■？??ＬＣ３ＩＩ?一、－?ｍａｒｎｒｎｍｍ＇??Ｐ６２??Ｂｅｅ??ｇａｐｄｈ?命??Ａ：Ｂｌａｎｋ?组，Ｂ：?Ｖｅｃｔｏｒ?组，Ｃ：Ｏｖｅｒ－ＰｉｎＸ?１?组??图１－８?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ监测自噬相关调控蛋白ＬＣ３Ｉ、ＬＣ３ＩＩ、ｐ６２和Ｂｅｃｌｉｎ－１在各组鼻咽??癌细胞株的表达??Ｆｉｇｕｒｅ?１－８?Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ａｕｔｏｐｈａｇｙ－ｒｅｌａｔｅｄ?ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ?ｐｒｏｔｅｉｎｓ?ＬＣ３Ｉ，?ＬＣ３ＩＩ?＞?Ｐ６２?ａｎｄ?Ｂｅｃｌｉｎ－１?ｉｎ??ｅａｃｈ?ｇｒｏｕｐ?ｂｙ?ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ??３１??
【参考文献】：
期刊论文
[1]端粒酶检测新方法研究进展[J]. 孙丽芳,杨海堂,卫伟. 分析测试学报. 2019(10)
[2]膀胱癌组织中PVRL4、NF-κB p65、E-cadherin的表达变化及意义[J]. 杜刚,黄瑛. 山东医药. 2019(28)
[3]PinX1对食管癌细胞放射敏感性及活性氧水平的影响研究[J]. 刘杨,蒋月,毛荣虎,卢令聪,杨原源. 中华放射医学与防护杂志. 2019 (01)
[4]PI3K抑制剂抗肿瘤研究进展[J]. 蔡田恬,赵敏,王建平. 浙江中西医结合杂志. 2018(08)
[5]肿瘤发展过程中自噬与凋亡的相互作用[J]. 阚月一,王娅杰,李琦,李玉洁,杨庆,翁小刚,陈颖,蔡维艳,朱晓新. 中国比较医学杂志. 2018(02)
[6]自噬与鼻咽癌放疗研究进展[J]. 杨熙宇,赵国旗. 辐射研究与辐射工艺学报. 2017(05)
[7]细胞自噬与凋亡关系的分子机制研究进展[J]. 韩姣,曾凡军,陈世雄,龚正,龚亮,行妍妍,覃黎葵. 海南医学. 2016(04)
[8]沉默NF-κB p65基因可抑制鼻咽癌CNE-2干细胞的增殖和迁移并促进凋亡[J]. 吴顺龙,李亚军,胡瑶瑶,张娜,刘双,王颖,李少林. 肿瘤. 2016(02)
[9]自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤增强鼻咽癌细胞对放射和化学治疗的敏感性[J]. 宋乐乐,马琳艳,陈根德,黄莹莹,孙小锦,蒋琛琛,刘浩. 中南大学学报(医学版). 2016(01)
[10]PinX1基因对鼻咽癌细胞顺铂化疗敏感性的影响及其机制[J]. 申聪香,刘艳慧,文忠,杨柯柯,李冠雪,张沈华,张鑫雨. 中华医学杂志. 2015 (24)
本文编号：3446695
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