衣康酸二甲酯通过激活Nrf2/HO-1信号通路在真菌性角膜炎中发挥保护作用的研究

发布时间：2021-10-26 22:54

　　目的:研究衣康酸二甲酯（Dimethyl itaconate,DI）在烟曲霉菌（Aspergillus fumigatus,A.fumigatus）感染角膜炎中发挥的保护作用及其具体的作用机制。方法:1、烟曲霉菌感染C57BL/6小鼠角膜,给予小鼠角膜2m M DI或PBS处理,观察小鼠角膜感染后临床评分;菌落计数法检测感染小鼠角膜中真菌负荷;采用免疫荧光法、MPO法及流式细胞术检测PBS处理感染角膜、DI处理感染角膜中中性粒细胞数量的变化;采用PCR法和Western blot法检测各组小鼠角膜中IL-1β、CXCL1、核因子E2相关因子2（NF-E2-related factor-2,Nrf2）及血红素加氧酶1（Heme oxygenase-1,HO-1）m RNA和蛋白的表达。2、0.25m M DI或PBS预处理人角膜上皮细胞2小时,菌丝刺激细胞8小时或24小时,采用PCR法和ELISA法检测各组细胞中IL-1β、IL-8及IL-6m RNA和蛋白的表达;采用细胞免疫荧光法检测人角膜上皮细胞中Nrf2的表达及定位。3、给予Nrf2抑制剂Brusatol（BT）或HO-1抑制剂Z... 

【文章来源】：青岛大学山东省

【文章页数】：49 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
引言
材料与方法
    1 实验材料
        1.1 实验对象
        1.2 实验所需耗材及试剂
        1.3 实验主要设备
    2 实验方法
        2.1 烟曲霉菌培养、菌液的制备
        2.2 小鼠真菌性角膜炎模型的建立
        2.3 小鼠角膜DI预处理
        2.4 人角膜上皮细胞的培养和烟曲霉菌菌丝刺激实验
        2.5 人角膜上皮细胞预处理实验
        2.6 检测小鼠角膜MPO
        2.7 小鼠角膜菌落计数实验
        2.8 免疫荧光染色实验方法
        2.9 流式细胞术检测
        2.10 RT-PCR实验方法
        2.11 Western blot实验方法
        2.12 ELISA实验步骤
        2.13 真菌生长分析
    3 统计学处理
结果
    1 DI对感染烟曲霉菌的C57BL/6小鼠角膜炎症程度的影响
    2 DI对烟曲霉菌诱导的炎症因子表达的影响
    3 DI通过激活Nrf2/HO-1 信号通路发挥抗炎作用
    4 DI抑制烟曲霉菌的生长
讨论
结论
参考文献
综述
    综述参考文献
攻读学位期间的研究成果
附录
致谢



本文编号：3460353