P-糖蛋白对H 2 O 2 诱导的视网膜色素上皮细胞氧化损伤的抑制作用
发布时间：2021-11-08 19:40
目的探讨P-糖蛋白对H2O2诱导的视网膜色素上皮（retinal pigment epithelium,RPE）细胞氧化损伤的抑制作用。方法取人RPE细胞株D407细胞,放入体积分数5%CO2培养箱中用含体积分数10%胎牛血清和双抗的DMEM培养基于37℃传代培养。先将细胞按H2O2浓度梯度处理,使用免疫印迹实验和P-糖蛋白荧光性底物罗丹明123蓄积实验确定H2O2对P-糖蛋白表达的最佳诱导浓度。预先使用1μmol·L-1P-糖蛋白抑制剂Tariquidar处理细胞,通过测量细胞内罗丹明123蓄积量检测P-糖蛋白功能活性。将细胞分成3组:对照组、H2O2模型组(400μmol·L-1)、H2O2+P-糖蛋白抑制剂组（H2O2+Tariquidar）,通过检测细胞...
【文章来源】：眼科新进展. 2020,40(10)北大核心
【文章页数】：5 页
【部分图文】：
免疫印迹实验检测不同浓度H2O2处理后RPE细胞P-糖蛋白表达情况
检测细胞内罗丹明123荧光强度可以了解P-糖蛋白的功能活性。结果显示,与0 μmol·L-1 H2O2相比,200 μmol·L-1、400 μmol·L-1和800 μmol·L-1H2O2处理细胞后细胞内荧光强度均下降,并在400 μmol·L-1浓度时出现最低值,差异均有统计学意义(均为P<0.01)(见图2)。这提示200 μmol·L-1、400 μmol·L-1和800 μmol·L-1H2O2能有效增加P-糖蛋白的转运活性。H2O2在浓度400 μmol·L-1时对P-糖蛋白表达和功能均有最明显的诱导作用,该浓度为最佳处理浓度,后续实验均以400 μmol·L-1 H2O2作为模型诱导浓度。2.3 P-糖蛋白对RPE细胞内ATP水平的影响
细胞内ATP水平检测结果见图4,H2O2模型组ATP水平较对照组显著下降,差异有统计学意义(P<0.001);而H2O2 + P-糖蛋白抑制剂组ATP水平则较H2O2模型组更低,差异亦有统计学意义(P<0.05),提示抑制P-糖蛋白功能可进一步加剧氧化应激所导致的ATP水平下降。图4 荧光素/荧光素酶ATP检测实验检测各组D407细胞内ATP水平
本文编号：3484084
【文章来源】：眼科新进展. 2020,40(10)北大核心
【文章页数】：5 页
【部分图文】：
免疫印迹实验检测不同浓度H2O2处理后RPE细胞P-糖蛋白表达情况
检测细胞内罗丹明123荧光强度可以了解P-糖蛋白的功能活性。结果显示,与0 μmol·L-1 H2O2相比,200 μmol·L-1、400 μmol·L-1和800 μmol·L-1H2O2处理细胞后细胞内荧光强度均下降,并在400 μmol·L-1浓度时出现最低值,差异均有统计学意义(均为P<0.01)(见图2)。这提示200 μmol·L-1、400 μmol·L-1和800 μmol·L-1H2O2能有效增加P-糖蛋白的转运活性。H2O2在浓度400 μmol·L-1时对P-糖蛋白表达和功能均有最明显的诱导作用,该浓度为最佳处理浓度,后续实验均以400 μmol·L-1 H2O2作为模型诱导浓度。2.3 P-糖蛋白对RPE细胞内ATP水平的影响
细胞内ATP水平检测结果见图4,H2O2模型组ATP水平较对照组显著下降,差异有统计学意义(P<0.001);而H2O2 + P-糖蛋白抑制剂组ATP水平则较H2O2模型组更低,差异亦有统计学意义(P<0.05),提示抑制P-糖蛋白功能可进一步加剧氧化应激所导致的ATP水平下降。图4 荧光素/荧光素酶ATP检测实验检测各组D407细胞内ATP水平
本文编号：3484084
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