JARID1B在大鼠RGCs发育过程中的表达及对体外RGCs存活影响的研究

发布时间：2022-10-15 17:49

　　目的:通过提取初生SD大鼠视网膜建立视网膜神经节细胞（RGCs）的原代培养模型并对其纯度进行鉴定,检测组蛋白去甲基化酶JARID1B在大鼠出生后RGCs发育过程中的表达,研究JARID1B在其发育过程中的变化;建立过表达JARID1B的RGCs细胞模型,初步探索其对体外培养RGCs存活的影响。为视功能恢复及视神经相关疾病的基础研究提供一种体外实验体系,并为JARID1B在RGCS发育及再生中起重要作用提供依据。方法:1.首先通过培育OX-7杂交瘤细胞提取含Thy1.1抗体上清液用于阳性筛选RGCs;然后选取成年SD大鼠雌性12只,雄性6只,2:1交配,选取出生7d（P7）以内的乳鼠,选用木瓜蛋白酶对其视网膜组织进行消化,制备RGCs细胞悬液,以巨噬细胞多克隆抗体对所得细胞进行初步筛选,再以山羊抗兔IgG（H+L）、山羊抗鼠IgG（H+L）+含Thy-1.1抗体上清液依次进行阴性、阳性选择,将所得RGCs悬浮后铺板于24孔细胞培养板（提前用鼠层粘连蛋白和多聚-D-赖氨酸预处理）中进行培养,培养72h后采用抗鼠Thy-1.1抗体通过免疫细胞化学方法鉴定其纯度。2.用Western Blot... 

【文章页数】：57 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
引言
第一部分 大鼠视网膜神经节细胞的原代培养及鉴定
    材料与方法
        1 实验材料与准备
        2 实验方法
    结果
        1 OX-7杂交瘤细胞培育情况
        2 RGCs形态及生长情况观察
        3 免疫荧光鉴定结果
    讨论
        1 RGCs原代培养方法的选择与改进
        2 原代培养鉴定方法及时机的选择
        3 原代培养过程中经验与问题
第二部分 JARID1B在大鼠视网膜神经节细胞发育中的表达
    材料与方法
        1 标本采集与保存
        2 主要试剂及耗材
        3 主要设备及仪器
        4 实验方法
    结果
        1 WB检测H3K4me3 蛋白在大鼠视网膜发育中的表达变化
        2 q RT-PCR检测大鼠RGCs发育过程中JARID1B及相关分子的m RNA表达情况
        3 免疫荧光染色检测大鼠RGCs发育过程中JARID1B蛋白表达结果
    讨论
第三部分 JARID1B对体外RGCs存活影响的研究
    材料与方法
        1 实验材料及试剂
        2 实验方法
    结果
    讨论
结论
参考文献
综述
    综述参考文献
攻读学位期间的研究成果
缩略词表
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]癌钙调蛋白在炎症反应促视神经再生作用中的研究进展[J]. 马林昆,曹霞,罗生平.  国际眼科杂志. 2017(07)
[2]The progress in optic nerve regeneration, where are we?[J]. Jennifer Wei Huen Shum,Kai Liu,Kwok-fai So.  Neural Regeneration Research. 2016(01)
[3]Long Evans大鼠视网膜神经节细胞培养与鉴定[J]. 王艳华,王一,刘勇,王仕军,曾玉晓.  第三军医大学学报. 2004(05)
[4]睫状神经营养因子对培养大鼠视网膜神经节细胞的影响[J]. 袁容娣,贺翔鸽,叶剑,彭锡嘉.  中华眼底病杂志. 2002(04)
[5]大鼠视网膜神经节细胞的培养[J]. 钟一声,蒋幼芹,熊小玲.  中华眼科杂志. 1999(02)



本文编号：3691758