MiR-155通过C-maf调控过敏性鼻炎小鼠中的ILC2

发布时间：2023-04-26 00:02

　　目的:应用IL-33诱导的AR小鼠模型及C-maf干扰病毒,探究miR-155、C-maf和ILC2之间的调节关系。方法:1、小鼠AR模型的建立方法选取6-8周雌性Balb/c小鼠,分为实验组及对照组,实验组:经鼻腔滴入重组小鼠IL-33(Recombinant mouse IL-33,rmIL-33)试剂,剂量为0.5ug/20ul/只,连续滴鼻3天。对照组经鼻腔滴入相同体积无菌PBS,连续3天。在第4天处死小鼠,取其鼻黏膜组织进行苏木精-伊红(hematoxylin and eosin,HE)染色,观察鼻黏膜组织病理学改变。2、IL-33与miR-155模拟剂或抑制剂联合应用造模miR-155模拟剂(agomir)和miR-155抑制剂(antagomir)在运用rmIL-33之前3h开始进行滴鼻干预,对照组小鼠经鼻腔滴入无菌PBS。3、慢病毒的使用第1天每只老鼠滴鼻20ul,9×10⁸TU/ml的LMRi82714,第5天开始按方法1和2进行后续造模。4、实时荧光定量PCR(quantitative reverse transcriptase polymer...

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【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
中英文缩略词表
第1章 引言
第2章 材料
    2.1 实验动物
    2.2 试剂和耗材
    2.3 试剂配制
        2.3.1 rmIL-33 溶液的配制
        2.3.2 胶原酶I的配制
        2.3.3 miR-155 agomir和 antagomir溶液的配制
    2.4 序列
        2.4.1 引物序列
        2.4.2 C-maf干扰序列
    2.5 主要的仪器设备
第3章 方法
    3.1 慢病毒C-maf-shRNA的获取
    3.2 AR动物模型建立及miR-155 和慢病毒的使用
    3.3 小鼠鼻黏膜HE染色
    3.4 小鼠鼻黏膜蛋白提取及浓度测定
        3.4.1 提取小鼠鼻黏膜蛋白
        3.4.2 BCA法测蛋白浓度
    3.5 ELISA检测小鼠鼻黏膜中IL-5和IL-13 的表达水平
        3.5.1 检测原理(以IL-5 为例)
        3.5.2 试剂配制
        3.5.3 操作步骤
    3.6 细胞表面流式细胞染色(Cell Surface Flow Cytometry Staining)检测小鼠鼻黏膜和脾脏中ILC2 的比例
    3.7 qRT-PCR检测C-maf、Il-5和Il-13的mRNA的水平
        3.7.1 Trizol法提取组织和细胞中的总RNA
        3.7.2 逆转录为c DNA
        3.7.3 荧光定量PCR
    3.8 统计学分析
第4章 结果
    4.1 小鼠鼻黏膜组织HE染色
    4.2 MiR-155 可促进小鼠鼻黏膜中ILC2 的产生
    4.3 ELISA检测小鼠鼻黏膜中IL-5和IL-13 的变化
    4.4 慢病毒抑制效率检测及筛选
    4.5 干扰C-maf对小鼠鼻黏膜IL-5、IL-13 表达的影响
    4.6 MiR-155 调控鼻黏膜中IL-5和IL-13 的水平需要C-maf
第5章 讨论
第6章 结论
致谢
参考文献
综述
    参考文献



本文编号：3801326