不同血清型腺相关病毒载体转染小鼠视网膜后的表达效率

发布时间：2023-08-18 18:20

　　目的:研究不同血清型腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)载体介导的外源基因在视网膜中的表达效率,同时比较AAV载体和两种眼科常用启动子组合后转染小鼠视网膜的表达效率高低,为视网膜色素变性基因治疗选择合适的AAV载体与启动子提供依据。方法:AAV病毒根据衣壳蛋白不同可分为不同血清型,本课题选取视网膜疾病基因治疗中常用的AAV2/2、AAV2/5、AAV2/8和AAV2/9四种血清型AAV载体,并以绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)作为报告基因,用GFP的表达强度判断AAV载体介导的外源基因在视网膜中的表达效率。AAV载体纯化后滴度为1. 00×1013mg/L,注射1μL至C57BL/6J小鼠视网膜下腔,于2周取眼球做成冰冻切片,在共聚焦显微镜下观察GFP在小鼠视网膜各层的表达情况。选取在感光细胞内特异性表达最强的AAV2/8于第4周取眼球冰冻切片继续观察是否能持续稳定表达。随后选取眼科基因治疗最常用的广谱启动子CMV和由CMV增强子与鸡β-肌动蛋白启动子组成的CAG启动子,并构建AAV2/8-GFP-CMV和AAV2...

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【文章目录】：
1 资料与方法
    1.1 实验动物
    1.2 主要实验试剂与仪器
    1.3 AAV病毒载体构建与包装
    1.4 视网膜下腔注射
    1.5 小鼠眼球处理
    1.6 免疫荧光染色与采图
2 结果
    2.1 视网膜下腔注射
    2.2 不同血清型AAV载体携带的GFP报告基因在小鼠视网膜的表达
3 讨论



本文编号：3842705