高糖环境下OREBP在晶状体上皮细胞中的表达及调控机制

发布时间：2017-05-24 04:12

  本文关键词：高糖环境下OREBP在晶状体上皮细胞中的表达及调控机制，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:探讨渗透压反应元件结合蛋白(smotic response element binding protein,OREBP)在人晶状体上皮细胞(HLEC)中的表达及在高糖环境下的表达变化及调控机制,明确其在晶状体上皮细胞中的作用。方法:(1)体外培养人的晶状体上皮细胞系SRA01/04,分为两组:正常对照组,葡萄糖浓度为25mmol/L,高糖培养组,葡萄糖浓度为300mmol/L,用Real-time RT-PCR和western blot检测高糖刺激后细胞内OREBP的表达变化。然后用ERK、P38抑制剂预处理HLEC 45分钟后再培养于300mmol/L葡萄糖培养液中,用Real-time RT-PCR,western blot检测细胞内OREBP的表达变化。(2)收集2013年10月到2014年4月在青岛大学附属医院眼科就诊并行phaco+IOL植入手术的白内障患者的晶状体前囊膜,以103例(103眼)糖尿病患者前囊膜为病例组,154例(154眼)非糖尿病患者囊膜为对照组,以10例(10眼)无偿捐献的透明囊膜为空白对照。应用Real-time PCR技术检测各组前囊膜组织中OREBP m RNA的表达,免疫荧光技术检测OREBP蛋白水平的表达。(3)STZ诱导SD大鼠2型糖尿病模型,分别于2周、4周、8周、10周、12周断头法处死后取晶状体前囊膜用Real-time RT-PCR检测OREBP的表达变化。结果:(1)OREBP在人晶状体上皮细胞表达,高糖刺激后OREBP m RNA及蛋白表达明显升高,与对照组比较差异有统计学意义(p0.05);ERK,P38抑制剂预处理后,高糖刺激晶状体上皮细胞后OREBPm RNA及蛋白表达未发生明显升高,前后差异有统计学意义(p0.05);(2)OREBP在糖尿病患者晶状体前囊膜组织中表达高于健康白内障患者,且二者均高于透明囊膜。(3)糖尿病大鼠晶状体囊膜组织中OREBP m RNA表达于2周时升高最为显著,后逐渐下降,但始终高于健康大鼠囊膜组织。结论:(1)OREBP在高糖培养的晶状体上皮细胞中表达增高。(2)OREBP在糖尿病患者晶状体前囊膜组织中表达高于健康白内障患者,且二者均高于透明囊膜。(3)OREBP的改变受ERK,P38的调节,提示OREBP在维持晶状体上皮细胞渗透压的平衡中发挥作用并受ERK,P38的调控。
【关键词】：OREBP 晶状体上皮细胞 高糖 MAPK
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R776.1
【目录】：

• 摘要2-3
• Abstract3-6
• 引言6-8
• 第一章 材料和方法8-15
• 1.1 实验材料8-10
• 1.1.1 实验对象8
• 1.1.2 动物模型8
• 1.1.3 实验细胞8
• 1.1.4 撕取大鼠晶状体囊膜所需器材8-9
• 1.1.5实验主要仪器与设备9
• 1.1.6实验主要耗材和试剂9
• 1.1.7常用液体的配制及消毒9-10
• 1.2 实验方法10-14
• 1.2.1 细胞培养10
• 1.2.2 细胞高糖刺激实验10-11
• 1.2.3 抑制剂预处理实验11
• 1.2.4 人及大鼠晶状体囊膜RT-PCR实验11
• 1.2.5 Real-time PCR实验11-13
• 1.2.6 Western blot实验13-14
• 1.2.7 免疫荧光试验操作步骤14
• 1.3 结果观察及统计学处理14-15
• 第二章 结果15-18
• 2.1 永生化人晶状体上皮细胞（HLEC）的形态学观察15
• 2.2 高浓度葡萄糖刺激HLEC细胞实验结果15-16
• 2.2.1 Real-time PCR结果15
• 2.2.2 Western blot实验结果15-16
• 2.3 OREBP晶状体囊膜下上皮组织细胞中的表达16-17
• 2.3.1 Real-time PCR结果16
• 2.3.2 免疫荧光化学染色16-17
• 2.4 抑制剂预处理实验结果17-18
• 2.4.1 Real-time PCR结果17
• 2.4.2 Western blot实验结果17-18
• 第三章 讨论18-21
• 第四章 结论21-22
• 参考文献22-25
• 综述25-39
• 综述的参考文献33-39
• 攻读学位期间的研究成果39-40
• 附录40-43
• 致谢43-44

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