EBV/LMP1介导SPLUNC1调节miR-141-PTEN通路影响鼻咽癌细胞增殖与凋亡的分子机制
发布时间：2024-04-14 16:12
[研究背景] 研究发现DNA肿瘤病毒中有些病毒的编码产物能与宿主细胞内抑制细胞生长和促进细胞分化的蛋白结合,使其失活而发挥致瘤作用。EBV(Epstein-Barr virus, EBV)可能也具有此作用。我室克隆得到的鼻咽组织相关的特异性表达基因(nashopharynix associated specific, NASG),即短腭、肺及鼻咽上皮克隆(Short Palate, Lung and Nasal epithelium Clone1, SPLUNC1)在鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma, NPC)组织及细胞系中表达下调,是一个潜在的鼻咽癌抑瘤基因,初步研究发现SPLUNC1能促使感染EBV的细胞裂解,启动补体途径和抗体依赖细胞介导的细胞毒(antibody-dependent cell-mediatedcytotoxicity, ADCC)作用对EBV进行清除,并能通过抑制EBV关键基因潜伏膜蛋白1(Latent membrane protein1, LMP1)的表达降低EBV的致瘤能力。miRNA芯片筛查发现miR-141能受到SPLUNC1的调...
【文章页数】：128 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
目录
英文縮略词表
第一章 前言
技术路线
第二章 材料与方法
2.1 材料
2.1.1 细胞系
2.1.2 实验动物
2.1.3 菌株和质粒载体
2.1.4 试剂
2.1.5 引物
2.1.6 主要仪器
2.2 方法
2.2.1 构建稳定转染SPLUNC1的HNE2细胞系
2.2.2 HNE2/SPLUNC1和HNE2/GFP细胞感染EBV
2.2.3 构建瞬时转染SPLUNC1的NP69细胞系
2.2.4 siRNA干扰SPLUNC1细胞的构建
2.2.5 miRNA产品转染目的细胞
2.2.6 ATRA处理细胞
2.2.7 鼻咽癌标本及鼻咽慢性炎症对照标本采集
2.2.8 组织细胞通过显微切割进行纯化
2.2.9 RT-PCR鉴定培养细胞目的基因mRNA的表达
2.2.10 miRNA RealTime RT-PCR分析
2.2.11 采用Western-blot对培养细胞进行目的蛋白质鉴定
2.2.12 methyl thiazolyl tetrazolium(MTT)
2.2.13 流式细胞仪分析细胞周期与细胞凋亡率
2.2.14 免疫荧光试验
2.2.15 免疫组化试验
2.2.16 裸鼠成瘤试验
2.2.17 统计学分析
第三章 结果
第一部分 SPLUNC1抑制整合入细胞内EBV关键基因表达的同时SPLUNC1自身表达受损
3.1.1 细胞系SPLUNC1表达的筛选
3.1.2 SPLUNC1稳定转染细胞系的构建
3.1.3 SPLUNC1抑制整合入细胞内EBV关键基因的表达
3.1.4 EBV感染细胞导致SPLUNC1的表达降低
第二部分 SPLUNC1通过miR-141调控PTEN-Akt通路影响NPC细胞的增殖和凋亡
3.2.1 SPLUNC1影响NP69细胞和NPC细胞miR-141的表达
3.2.2 miR-141调控NP69细胞和NPC细胞PTEN的表达
3.2.3 SPLUNC1通过miR-141调控PTEN的表达
3.2.4 SPLUNC1通过PTEN影响Akt信号通路
3.2.5 SPLUNC1通过PTEN-Akt通路影响NPC细胞的增殖和凋亡
3.2.6 裸鼠实验证实SPLUNC1影响PTEN-Akt信号通路
第三部分 EBV与SPLUNC1相互影响共同调控miR-141-PTEN-Akt信号通路
3.3.1 LMP1通过抑制SPLUNC1影响miR-141-PTEN-Akt信号通路
3.3.2 NP69-LMP1中恢复SPLUNC1的表达能重新失活Akt通路
第四章 讨论
第一部分 SPLUNC1抑制整合入细胞内EBV关键基因表达的同时SPLUNC1自身表达受损
第二部分 SPLUNC1通过miR-141调控PTEN-Akt信号通路影响NPC细胞增殖和凋亡
第三部分 EBV与SPLUNC1相互影响共同调控miR-141-PTEN-Akt信号通路
第四部分 尚需继续研究的课题
结论
参考文献
综述一
参考文献
综述二
参考文献
致谢
攻读博士学位期间主要的研究成果
本文编号：3954946
【文章页数】：128 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
目录
英文縮略词表
第一章 前言
技术路线
第二章 材料与方法
2.1 材料
2.1.1 细胞系
2.1.2 实验动物
2.1.3 菌株和质粒载体
2.1.4 试剂
2.1.5 引物
2.1.6 主要仪器
2.2 方法
2.2.1 构建稳定转染SPLUNC1的HNE2细胞系
2.2.2 HNE2/SPLUNC1和HNE2/GFP细胞感染EBV
2.2.3 构建瞬时转染SPLUNC1的NP69细胞系
2.2.4 siRNA干扰SPLUNC1细胞的构建
2.2.5 miRNA产品转染目的细胞
2.2.6 ATRA处理细胞
2.2.7 鼻咽癌标本及鼻咽慢性炎症对照标本采集
2.2.8 组织细胞通过显微切割进行纯化
2.2.9 RT-PCR鉴定培养细胞目的基因mRNA的表达
2.2.10 miRNA RealTime RT-PCR分析
2.2.11 采用Western-blot对培养细胞进行目的蛋白质鉴定
2.2.12 methyl thiazolyl tetrazolium(MTT)
2.2.13 流式细胞仪分析细胞周期与细胞凋亡率
2.2.14 免疫荧光试验
2.2.15 免疫组化试验
2.2.16 裸鼠成瘤试验
2.2.17 统计学分析
第三章 结果
第一部分 SPLUNC1抑制整合入细胞内EBV关键基因表达的同时SPLUNC1自身表达受损
3.1.1 细胞系SPLUNC1表达的筛选
3.1.2 SPLUNC1稳定转染细胞系的构建
3.1.3 SPLUNC1抑制整合入细胞内EBV关键基因的表达
3.1.4 EBV感染细胞导致SPLUNC1的表达降低
第二部分 SPLUNC1通过miR-141调控PTEN-Akt通路影响NPC细胞的增殖和凋亡
3.2.1 SPLUNC1影响NP69细胞和NPC细胞miR-141的表达
3.2.2 miR-141调控NP69细胞和NPC细胞PTEN的表达
3.2.3 SPLUNC1通过miR-141调控PTEN的表达
3.2.4 SPLUNC1通过PTEN影响Akt信号通路
3.2.5 SPLUNC1通过PTEN-Akt通路影响NPC细胞的增殖和凋亡
3.2.6 裸鼠实验证实SPLUNC1影响PTEN-Akt信号通路
第三部分 EBV与SPLUNC1相互影响共同调控miR-141-PTEN-Akt信号通路
3.3.1 LMP1通过抑制SPLUNC1影响miR-141-PTEN-Akt信号通路
3.3.2 NP69-LMP1中恢复SPLUNC1的表达能重新失活Akt通路
第四章 讨论
第一部分 SPLUNC1抑制整合入细胞内EBV关键基因表达的同时SPLUNC1自身表达受损
第二部分 SPLUNC1通过miR-141调控PTEN-Akt信号通路影响NPC细胞增殖和凋亡
第三部分 EBV与SPLUNC1相互影响共同调控miR-141-PTEN-Akt信号通路
第四部分 尚需继续研究的课题
结论
参考文献
综述一
参考文献
综述二
参考文献
致谢
攻读博士学位期间主要的研究成果
本文编号：3954946
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