喉鳞状细胞癌进展中FOXP4和miR-4476协同调控表达的临床意义

发布时间：2025-03-30 03:34

　　 目的:检测微RNA(microRNA,miRNA,miR)-4476在喉鳞状细胞癌(laryngeal squamous cell carcinoma,LSCC)组织及人喉癌细胞系中的表达水平,以及其对喉癌细胞体外增殖、迁移及侵袭能力的影响,并检测miR-4476与转录因子叉头框蛋白4(fork head box protein 4,FOXP4)的相关性及可能的结合位点。方法:应用实时荧光定量PCR法和免疫组织化学SP法检测LSCC组织及其相应癌旁正常组织中FOXP4 mRNA和蛋白的表达情况。应用在线网站预测与FOXP4有调控作用的miRNA,采用实时荧光定量PCR法检测miR-4476在LSCC组织与其相应癌旁正常组织及4种人喉癌细胞系中的表达情况,并检测其与FOXP4表达的相关性。采用染色体免疫共沉淀技术检测FOXP4与miR-4476启动子区的结合情况。将pcDNA3.1-FOXP4与报告基因载体pGL3-miR-4476启动子区共转染至293T细胞中,通过检测荧光素酶报告基因荧光信号活性分析FOXP4对miR-4476启动子区的影响。将miR-4476模拟物及抑制物分别转染人...

【文章页数】：12 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 细胞与主要试剂
    1.2 病理标本与临床资料
    1.3 细胞培养
    1.4 实时荧光定量PCR法检测LSCC组织中FOXP4 mRNA表达
    1.5 免疫组织化学SP法检测LSCC组织中FOXP4蛋白表达
    1.6 实时荧光定量PCR法检测LSCC组织和喉癌细胞系中miR-4476的表达水平
    1.7 pcDNA3.1-FOXP4和si-FOXP4分别转染TU177细胞
    1.8 染色质免疫沉淀-PCR检测FOXP4与miR-4476启动子区的结合情况
    1.9 双荧光素酶报告基因检测系统分析FOXP4对miR-4476启动子区的影响
    1.10 miR-4476 mimics或inhibitor转染喉癌细胞
    1.11 MTS实验检测miR-4476对喉癌细胞增殖能力的影响
    1.12 平板克隆形成实验检测miR-4476对喉癌细胞克隆形成能力的影响
    1.13 Transwell迁移和侵袭实验检测miR-4476对喉癌细胞迁移和侵袭能力的影响
    1.14 统计学方法
2 结 果
    2.1 LSCC中FOXP4 mRNA和蛋白表达及其与临床病理特征的关系
    2.2 LSCC中miR-4476表达及其与临床病理资料的关系
    2.3 si-FOXP4或pcDNA3.1-FOXP4转染TU177细胞后FOXP4的表达水平
    2.4 FOXP4与miR-4476表达的相关性
    2.5 FOXP4与miR-4476启动子区的结合
    2.6 喉癌细胞中miR-4476表达及miR-4476模拟物和抑制物转染效率
    2.7 miR-4476表达上调及下调对细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响
3 讨 论



本文编号：4038128