大鼠视神经挫伤后视网膜CXCR3及CCR5的表达变化

发布时间：2017-06-02 22:09

  本文关键词：大鼠视神经挫伤后视网膜CXCR3及CCR5的表达变化，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：[目的]利用SD大鼠视神经夹挫伤模型,研究视神经挫伤后不同时间点趋化因子受体CXCR3及CCR5在大鼠视网膜的表达变化趋势,探讨CXCR3、CCR5在视神经挫伤后对视网膜神经节细胞凋亡的作用,为进一步了解外伤性视神经病变后继发视网膜神经节细胞凋亡的机制提供新的思路。[方法]健康成年SPF级雌性SD大鼠120只,双眼正常。将大鼠随机分组,分为视神经损伤组(60只),视神经假损伤组(60只),在相同条件下进行饲养。两组按视神经挫伤后不同时间点分为5个亚组,即损伤后12h组、24h组、3d组、5d组、7d组。损伤组大鼠左眼设为损伤眼,用夹持力为50g的反向夹持镊于球后2mm处,夹持视神经10s,建立视神经挫伤模型；假损伤组大鼠左眼设为假损伤组,仅暴露视神经,不进行夹持。于损伤后相应时间点摘取眼球。用FITC-lectin标记视网膜小胶质细胞,GFAP标记视网膜星形胶质细胞,观察大鼠视神经挫伤后视网膜小胶质细胞及星形胶质细胞的分布及活化情况；同时通过免疫组织化学技术,检测CXCR3、CCR5在大鼠视神经挫伤后不同时间点的视网膜上的蛋白定位情况；采用Real-Time PCR及Western Blot法分别检测大鼠视神经挫伤后不同时间点视网膜组织中CXCR3、CCR5 mRNA及蛋白含量的变化。结果采用SPSS17.0软件进行统计学分析。[结果]1.FITC-lectin标记小胶质细胞发现假损伤组视网膜lectin阳性细胞主要位于视网膜神经纤维层、内网状层,少量位于外网状层,在内核层及外核层分布较少,且呈静息形态。视神经挫伤后3d可观察到少量激活态的小胶质细胞。视神经挫伤后5d视网膜各层出现明显增多的lectin阳性细胞,呈激活态。2. GFAP标记星形胶质细胞发现假损伤组视网膜仅在视网膜神经纤维层见少量的GFAP阳性表达。视神经挫伤后GFAP表达随损伤时间的延长逐渐增多增强。在视神经挫伤后5d视网膜神经节细胞层、内网状层、内核层、外网状层出现GFAP表达明显增多,且可见向外延伸的线性表达。3. CXCR3、CCR5免疫组化结果：假损伤组视网膜上仅在视网膜节细胞层发现极少量散在分布有CXCR3/CCR5的阳性细胞。而视神经挫伤后视网膜开始出现明显增多的着色细胞。在视神经挫伤后5d视网膜节细胞层、内核层、外核层阳性染色细胞显著增多。4. Real-Time PCR方法检测视神经挫伤后不同时间点视网膜中CXCR3、CCR5 mRNA表达水平的变化发现：在损伤后24h,CXCR3 mRNA表达即升高(P0.05),而CCR5 mRNA表达也升高,但与假损伤组相比无统计学差异(P0.05)；损伤后3d,CXCR3与CCR5的mRNA表达量均大幅度降低,低于正常水平,与假损伤组比较有统计学差异(P0.05)。损伤后5d, CXCR3、CCR5 mRNA表达量均大幅度升高至峰值(P0.05)；损伤后7d,CXCR3 mRNA表达较损伤后5d略有下降,与假损伤组相比仍有统计学差异(P0.05),而CCR5 mRNA表达基本回复至正常水平,和假损伤组相比无统计学差异(P0.05)。5. Western Blot方法检测视神经挫伤后不同时间点视网膜中CXCR3、CR5蛋白表达水平,结果与RT-PCR检测结果基本一致：损伤后3d, CXCR3与CCR5的蛋白表达量均降低至正常水平以下,与假损伤组比较有统计学差异(P0.05)；损伤后5d, CXCR3、CCR5蛋白表达量大幅度升高至峰值(P0.05)；损伤后7d, CXCR3蛋白表达水平略有下降,而CCR5蛋白表达基本回复至正常水平(P0.05)。[结论]大鼠视神经挫伤后视网膜出现小胶质细胞及星形胶质细胞的增生、活化现象；大鼠视神经挫伤后视网膜CXCR3及CCR5表达升高时间与视网膜小胶质细胞及星形胶质细胞大量活化时间一致,二者表达增强可能与视神经挫伤后胶质活化有关,可能参与并加重视神经挫伤后视网膜神经节细胞的凋亡。
【关键词】：视神经损伤 视网膜神经节细胞 CXCR3 CCR5
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R779.12
【目录】：

• 英文缩写一览表5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 引言11-15
• 材料与方法15-28
• 结果28-32
• 讨论32-37
• 结论37
• 问题与展望37-38
• 参考文献38-43
• 综述43-51
• 参考文献48-51
• 在读期间发表文章51-52
• 致谢52

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 曹海静;朱鸿;施彩虹;;CXC族趋化因子受体在糖尿病大鼠视网膜中的表达研究[J];上海交通大学学报(医学版);2013年05期

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本文编号：416628