腹股沟皮下注射法免疫治疗小鼠变应性鼻炎及治疗前后鼻黏膜microRNA的变化研究

发布时间：2017-06-06 09:25

  本文关键词：腹股沟皮下注射法免疫治疗小鼠变应性鼻炎及治疗前后鼻黏膜microRNA的变化研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：第一部分 腹股沟皮下注射法免疫治疗小鼠变应性鼻炎的实验研究目的：探讨腹股沟皮下注射法免疫治疗小鼠变应性鼻炎的可行性。方法：36只雌性BALB/c小鼠,6～8周龄,随机分为6组,每组6只,包括A空白组、A模型组、A治疗组、B空白组、B模型组和B治疗组(A为腹股沟皮下注射,B为颈背部皮下注射)。卵清蛋白(ovalbumin, OVA)AR模型建立成功后治疗组用OVA进行免疫治疗,隔天一次,共15次。鼻腔连续激发第七天时,进行小鼠AR症状评分,鼻黏膜变色酸2R染色统计鼻黏膜嗜酸性粒细胞(eosinophils,EOS)数,ELISA法检测血清OVA-sIgE表达和鼻腔灌洗液中IL-4和IFN-γ表达,计算IFN-γ与IL-4比值。以SPSS 17.0软件进行数据分析。结果：治疗前,模型组和治疗组AR症状评分均大于5,治疗后,A治疗组AR症状评分小于5。A空白组、A模型组、A治疗组、B空白维、B模型组和B治疗组EOS数分别为0.78±0.31、21.60±2.90、10.43±2.56、0.83±0.46、22.44±3.39和23.40±4.24,A治疗组EOS数较A模型组明显减少,差异具有显著性(t=7.08,P0.05),B治疗组EOS数与B模型组比较,差异无显著性(t=0.71,P0.05)；空白组OVA-sIgE的表达为阴性,其余组为阳性；各组IFN-γ与IL-4比值分别为10.75±3.38、10.38±3.08、3.02±0.69、2.71±0.89、2.52±0.30和5.45±1.41,A治疗组IFN-γ与IL-4比值较A模型组明显升高,差异具有显著性意义(t=5.08 P0.05),B治疗组IFN-γ与IL-4比值与B模型组比较,差异无显著性(t=1.60,P0.05)结论：腹股沟皮下注射免疫治疗小鼠变应性鼻炎效果好,周期短,操作简单,可行性好,是特异性免疫治疗小鼠变应性鼻炎的一种新方法。第二部分变应性鼻炎特异性免疫治疗前后鼻黏膜microRNA的变化研究目的：研究microRNA在变应性鼻炎特异性免疫治疗前后表达的变化。方法：雌性BALB/c小鼠,6-8周龄,随机分为对照组、模型组和治疗组。采用卵清蛋白腹腔注射及滴鼻法建立AR小鼠模型,以腹股沟皮下注射法进行SIT,以叠加法进行行为学评分,鼻黏膜嗜酸性粒细胞计数,酶联免疫吸附试验检测血清中特异性OVA-slgE的表达及鼻腔灌洗液中IFN-γ与IL-4的表达。3组小鼠分别用microRNA基因芯片进行初步筛查,筛查治疗组与模型组相比Fold change≥2.0且P0.05的microRNA,而后用GeneSpring12.5软件进行靶基因预测并与免疫反应和炎症相关通路中的mRNA取交集。用MEVA.6.0软件做聚类分析图、Cytoscape_v2.8.2做靶基因网络图。结果：AR小鼠模型及SIT成功。治疗组与模型组相比有9个microRNA表达下调,6个microRNA表达上调。聚类分析可明显看出治疗组和模型组分别聚在两个分支。这15个microRNA的靶基因有5753个,取交集后得到451个与SIT相关性更大的靶基因。从网络图看出,一个microRNA可以调控多个靶基因,一个基因也可以受多个microRNA的调控,它们相互作用可能参与了SIT的机制。结论：鼻黏膜microRNA的表达在AR的SIT前后发生了变化,microRNA可能参与了AR的SIT过程；通过生物信息学方法缩小了microRNA靶基因的查找范围,有利于研究AR在SIT后变化的microRNA对其相关靶基因表达的影响,为AR的发病和SIT机制的认识提供依据。
【关键词】：鼻炎 变应性 卵清蛋白 免疫治疗 皮下注射 免疫球蛋白E 白细胞介素4 干扰素γ 变应性鼻炎 特异性免疫治疗 microRNA 基因芯片 聚类分析 基因调节网络
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R765.21
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 第一部分 腹股沟皮下注射法免疫治疗小鼠变应性鼻炎的实验研究10-26
• 引言10-11
• 材料和方法11-17
• 结果17-21
• 讨论21-23
• 结论23
• 参考文献23-26
• 第二部分 变应性鼻炎特异性免疫治疗前后鼻黏膜MICRORNA的变化研究26-46
• 引言26-30
• 材料和方法30-35
• 结果35-41
• 讨论41-43
• 结论43
• 参考文献43-46
• 综述46-53
• 参考文献50-53
• 缩略词表53-54
• 在读期间发表的文章54-55
• 致谢55

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