NADPH氧化酶在角膜碱烧伤中作用的研究

发布时间：2017-06-07 15:16

  本文关键词：NADPH氧化酶在角膜碱烧伤中作用的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:探讨NADPH氧化酶(NOXs)在小鼠碱烧伤模型中的作用。方法:将6-8周的C57小鼠右眼建立碱烧伤模型。免疫荧光用于观察NOXs在人碱烧伤角膜以及小鼠碱烧伤角膜的表达情况。免疫印迹和实时荧光PCR法用于检测NOXs在小鼠碱烧伤模型中的表达情况。小鼠动物模型分为4组:左眼作为正常对照组、实验对照组(PBS组)、DPI给药组、APO给药组。裂隙灯下观察3天、7天、14天各组小鼠碱烧伤后角膜的新生血管生长情况。碱烧伤后7天应用免疫荧光法检测各组3-NT(3-硝基络氨酸)、CD11b的蛋白表达情况,免疫印迹法检测各组3-NT的蛋白表达情况,实时荧光PCR法检测各组炎症因子(TNF-α,IL-1β,IL-6),血管生长因子(VEGF,VEGFR1,VEGFR2)表达情况。CellROX试剂用于ROS的含量检测。碱烧伤后14天应用荧光素钠造影观察新生管的变化情况。结果:免疫荧光结果显示在角膜碱烧伤中NOX2和NOX4表达量明显升高。免疫印迹法以及荧光定量PCR检测结果显示,与正常组相比,碱烧伤组Nox2、Nox4蛋白以及mRNA水平明显增加。NADPH氧化酶抑制剂应用后,免疫荧光染色检测显示:DPI以及Apo可以显著减少碱烧伤后CD11b的表达升高。荧光定量PCR检测结果显示,炎症因子IL-1β和IL-6的mRNA表达水平在碱烧伤中显著高于正常角膜中,DPI以及APO可以显著地降低IL-1β和IL-6的mRNA表达水平;然而TNF-α的mRNA表达水平在各组间没有显著差异;VEGF、VEGFR1、VEGFR2的mRNA表达水平在碱烧伤中显著高于正常角膜中,在DPI组以及APO组中可以显著地降低。ROS的含量检测显示,碱烧伤后ROS的含量显著增加,DPI以及Apo可以显著地减少ROS的含量。心脏灌注荧光素钠角膜铺片结果显示:碱烧伤后角膜新生血管的面积显著高于正常组,DPI以及Apo可以显著减少角膜新生血管的面积。结论:在角膜碱烧伤中NADPH氧化酶明显升高。抑制NADPH氧化酶可以减缓碱烧伤对角膜的伤害,这可能为治疗角膜碱烧伤提供一个新的靶点。
【关键词】：角膜碱烧伤 NADPH氧化酶 氧化应激 炎症
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R779.1
【目录】：

• 摘要3-4
• ABSTRACT4-8
• 中英文缩略词表8-9
• 第1章 引言9-11
• 第2章 材料与方法11-19
• 2.1 材料11-15
• 2.1.1 人体组织材料11
• 2.1.2 动物11
• 2.1.3 主要试剂11
• 2.1.4 抗体11-12
• 2.1.5 主要仪器12
• 2.1.6 溶液配制12-15
• 2.2 实验方法15-18
• 2.2.1 碱烧伤动物模型的制作以及NOX抑制剂的治疗15
• 2.2.2 免疫荧光染色15
• 2.2.3 实时定量（real-time）PCR15-17
• 2.2.4. 蛋白免疫印迹法17-18
• 2.2.5. ROS含量的检测18
• 2.2.6. 角膜新生血管的检测18
• 2.3 统计学分析方法18-19
• 第3章 结果19-28
• 3.1 NADPH氧化酶在人和小鼠碱烧伤后角膜中的表达情况19-20
• 3.2 NADPH氧化酶抑制剂降低碱烧伤后角膜组织中的氧化应激水平20-22
• 3.3 NADPH氧化酶抑制剂降低碱烧伤后角膜组织中的炎症水平22-24
• 3.4 NADPH氧化酶抑制剂降低角膜碱烧伤后的角膜新生血管24-25
• 3.5 NADPH氧化酶抑制剂降低角膜碱烧伤后角膜组织中的VEGF及其受体，MMP的mRNA水平25-28
• 第4章 讨论28-31
• 第5章 结论31-32
• 致谢32-33
• 参考文献33-36
• 综述36-45
• 参考文献42-45

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

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本文编号：429471