VEGF-B促进糖尿病小鼠角膜神经再生的机制研究

发布时间：2017-06-10 08:20

  本文关键词：VEGF-B促进糖尿病小鼠角膜神经再生的机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的通过I型糖尿病小鼠模型和体外三叉神经节细胞模型,研究血管内皮生长因子B(VEGF-B)对糖尿病小鼠角膜上皮和神经再生的作用,并探讨其机制。方法选取链脲佐菌素(STZ)诱导的I型糖尿病小鼠与同龄对照小鼠,建立角膜上皮损伤再生模型。Western blot和免疫组化检测正常和糖尿病小鼠角膜上皮内源性VEGF-B表达量差异;荧光素钠染色检测外源性VEGF-B对糖尿病小鼠角膜上皮损伤愈合速率的影响;角膜整体铺片染色检测VEGF-B对糖尿病小鼠角膜神经再生的作用。体外培养小鼠原代三叉神经节细胞,加入中和抗体以及小分子抑制剂,免疫荧光检测VEGF-B对三叉神经节细胞轴突生长、线粒体氧化应激状态的影响;Western blot检测VEGF-B对三叉神经节细胞内信号通路的活化情况。结果(1)与同龄对照相比,随着糖尿病小鼠病程的延长,糖尿病小鼠体重显著减轻,血糖水平显著升高,且小鼠角膜敏感度显著降低。角膜神经染色显示糖尿病小鼠的角膜上皮末梢神经纤维密度显著减少,且基底膜神经显微结构显著改变。正常小鼠再生角膜上皮中的VEGF-B表达水平较正常角膜上皮显著增强,而在糖尿病小鼠再生角膜上皮中,VEGF-B的表达未见显著提高。(2)外源性添加VEGF-B可显著促进正常及糖尿病小鼠角膜神经、上皮再生和角膜敏感度恢复。(3)糖尿病导致三叉神经节细胞内ROS水平显著升高,线粒体处于氧化应激状态。VEGF-B可以显著降低三叉神经节细胞内ROS水平,显著降低其线粒体应激水平,封闭VEGFR-1而非NRP-1,可以完全抵消VEGF-B对糖尿病三叉神经节细胞线粒体应激水平的恢复。(4)VEGF-B可显著促进正常及糖尿病小鼠三叉神经节细胞轴突的生长以及下游Akt、GSK3β和S6K磷酸化水平升高。封闭VEGFR-1而非NRP-1,可完全抵消VEGF-B的促进功能。加入Akt、GSK3β、mTOR的抑制剂,可完全阻断VEGF-B的促神经生长作用。结论(1)随着病程延长,糖尿病小鼠出现角膜上皮神经退行,敏感度下降等糖尿病角膜病变特征,且再生角膜上皮中VEGF-B表达显著降低。(2)外源性VEGF-B可以促进糖尿病小鼠的角膜神经修复及上皮愈合,促进角膜敏感度恢复。(3)VEGF-B通过恢复线粒体应激水平和活化VEGFR-1及其下游PI-3K/Akt-GSK-3β-m TOR信号通路促进糖尿病三叉神经节细胞轴突的生长。
【关键词】：VEGF-B 糖尿病 角膜神经再生 角膜敏感度 VEGFR-1
【学位授予单位】：济南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R587.2;R772.2
【目录】：

• 摘要6-8
• Abstract8-10
• 主要符号表10-11
• 引言11-13
• 第一部分 糖尿病小鼠角膜神经病变的病理特征13-25
• 第1章 材料与方法13-21
• 1.1 材料与试剂13-15
• 1.2 实验方法15-21
• 第2章 结果21-24
• 2.1 糖尿病小鼠的体征变化21
• 2.2 糖尿病小鼠角膜神经支配的变化21-22
• 2.3 糖尿病小鼠再生角膜上皮中VEGF-B表达减少22-24
• 第3章 小结24-25
• 第二部分 VEGF-B促进糖尿病小鼠角膜神经损伤再生及上皮愈合25-32
• 第1章 材料与方法25-28
• 1.1 材料与试剂25-26
• 1.2 实验方法26-28
• 第2章 结果28-31
• 2.1 外源性VEGF-B促进糖尿病小鼠角膜神经修复28-30
• 2.2 VEGF-B促进糖尿病小鼠角膜上皮损伤修复30-31
• 第3章 小结31-32
• 第三部分 VEGF-B通过活化VEGFR-1 及下游PI3K-GSK3β-mTOR通路促进糖尿病小鼠角膜神经再生32-43
• 第1章 材料与方法32-37
• 1.1 材料与试剂32-34
• 1.2 实验方法34-37
• 第2章 结果37-42
• 2.1 三叉神经节细胞表达VEGFR-1 及NRP-137-38
• 2.2 VEGF-B促进糖尿病环境下三叉神经细胞轴突生长的作用及机制38-42
• 第3章 小结42-43
• 讨论43-45
• 结论45-46
• 参考文献46-50
• 攻读学位期间取得的研究成果50-51
• 致谢51

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本文编号：437881