携带绿色荧光报告基因EBV-LMP2A真核表达载体构建及转染鼻咽癌细胞

发布时间：2017-06-16 01:08

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【摘要】：目的构建携带绿色荧光基因的真核表达载体p IRES2-Zs-Green1-LMP2A,并转染至鼻咽癌CNE2细胞。方法从EB病毒阳性的狨猴淋巴瘤细胞B95-8中克隆EB病毒编码的EBV潜伏膜蛋白2A(latent membrane protein 2A,LMP2A)序列,并定向克隆入p IRES2-Zs-Green1载体,双酶切及测序鉴定重组的真核表达载体p IRES2-Zs-Green1-LMP2A;通过脂质体转染将重组的真核表达载体p IRES2-Zs-Green1-LMP2A转染至鼻咽癌CNE2细胞(实验组),同时另设转染p IRES2-Zs-Green1载体的阴性对照组及未转染的空白对照组。利用质粒所携带的绿色荧光蛋白表达计算细胞转染效率,RT-PCR检测目的基因LMP2A在鼻咽癌CNE2细胞中的表达。结果双酶切及测序鉴定证实真核表达载体p IRES2-Zs-Green1-LMP2A构建成功,荧光显微镜下发现实验组和阴性对照组细胞均发出绿色荧光,实验组细胞转染率约为75%;RT-PCR检测发现实验组细胞中有目的基因LMP2A表达,但阴性对照组和空白对照组均未检测到目的基因表达。结论成功构建了p IRES2-Zs-Green1-LMP2A真核表达载体并转染鼻咽癌CNE2细胞,目的基因LMP2A可在转染的鼻咽癌CNE2细胞中稳定表达。
【作者单位】： 广西医科大学生物化学与分子生物学教研室;广西医科大学医学科学实验中心;
【关键词】： 鼻咽肿瘤 EBV潜伏膜蛋白A 序列克隆 pIRES-Zs-Green载体 pIRES-Zs-Green-LMPA真核表达载体 基因转染 基因表达
【基金】：国家自然科学基金资助项目(81260405) 广西区域性高发肿瘤早期防治研究重点实验室基金项目(GK2013-A-02-02)
【分类号】：R739.63
【正文快照】： EB病毒(epstein-barr virus,EBV)是一种线性、双链DNA病毒。EB病毒感染的恶性肿瘤与潜在的感染形式有关,其编码的潜在蛋白可间接引起细胞转化。潜伏膜蛋白2A(latent membrane protein 2A,LMP2A)是一种由EB病毒编码的致瘤蛋白,可在感染的潜伏细胞表面形成一个贴片,亦可在细胞核

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