喉鳞癌中mir-193b的表达及其对Hep-2细胞增殖的影响

发布时间：2017-06-26 14:21

  本文关键词：喉鳞癌中mir-193b的表达及其对Hep-2细胞增殖的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：应用实时荧光定量PCR验证喉鳞癌组织miR-193b的表达情况。构建hsa-miR-193b-3p慢病毒表达载体,制备并包装慢病毒,培养能够稳定表达目的基因的喉鳞状细胞癌Hep-2细胞株。探讨反义寡核苷酸重组慢病毒(ASO-miR-193b)对喉鳞癌细胞生物学行为的影响。方法：采用实时荧光定量PCR检测喉癌组织以及癌旁组织中miR-193b的表达情况。设计并构建miR-193b质粒表达载体,共转染293T细胞后得到下调miR-193b表达的慢病毒载体。实验均分三组：实验组(miR-193b)、空白组、阴性对照组(NC),将其转染喉鳞癌Hep-2细胞,实时荧光定量PCR(Q-PCR)检测miR-193b的表达水平来验证其转染效率。转染喉鳞癌Hep-2细胞后通过CCK-8增殖实验、克隆形成实验等观察其对Hep-2细胞增殖能力的影响。结果：Q-PCR检测发现喉鳞癌组织较癌旁组织miR-193b表达水平显著升高。成功构建下调hsa-miR-193b表达的慢病毒表达载体,滴度为1×108TU/ml的慢病毒颗粒。慢病毒载体下调Hep-2细胞内miR-193b的表达,细胞克隆形成率与对照组相比明显降低,P0.05,48-72h组与对照组相比,ASO-miR-193b Hep-2细胞吸光度明显减少(P0.05)。结论：本研究发现喉癌组织较癌旁组织miR-193b表达显著上调,提示miR-193b高表达可能与喉癌的发生发展相关。成功构建稳定且高表达的反义miR-193b的慢病毒表达载体。ASO-miR-193b可有效抑制喉癌细胞增殖。从而说明miR-193b的发挥致癌作用,为喉癌的基因治疗提供新的治疗靶点和理论依据。
【关键词】：miR-193b 慢病毒 喉鳞癌 反义寡核苷酸 增殖
【学位授予单位】：延边大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R739.65
【目录】：

• 中文摘要6-7
• Abstract7-11
• 第一章 绪论11-13
• 第二章 资料与方法13-22
• 2.1 研究对象13
• 2.2 主要试剂和实验仪器13-14
• 2.2.1 实验试剂13
• 2.2.2 实验材料13-14
• 2.2.3 实验仪器14
• 2.3 实验方法14-21
• 2.3.1 组织标本收集14
• 2.3.2 实时荧光定量PCR检测miRNA-193b在喉癌组织中的表达14-17
• 2.3.3 细胞培养17-18
• 2.3.4 慢病毒载体的构建与鉴定18-21
• 2.3.5 microRNA-193b重组慢病毒转染喉鳞癌Hep-2细胞21
• 2.3.6 CCK8法检测细胞增殖率21
• 2.3.7 克隆形成实验检测喉鳞癌Hep-2细胞的增殖21
• 2.4 统计学处理21-22
• 第三章 结果22-28
• 3.1 反义miRNA-193b慢病毒载体的构建与鉴定22-24
• 3.2 Real-time PCR检测miR-193b在喉鳞癌组织中高表达24-25
• 3.3 重组慢病毒ASO-miR-193b的转染效率25-26
• 3.4 Real-time PCR检测ASO-miR-193b在喉鳞癌Hep-2细胞中的表达26
• 3.5 ASO-miR-193b抑制喉鳞癌细胞增殖26-28
• 第四章 讨论28-31
• 第五章 结论31-32
• 致谢32-33
• 参考文献33-37
• 附录37-38
• 综述38-47
• 参考文献43-47

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