糖尿病大鼠病程不同阶段角膜上皮紧密连接蛋白claudin-1表达的变化

发布时间：2017-07-15 15:17

  本文关键词：糖尿病大鼠病程不同阶段角膜上皮紧密连接蛋白claudin-1表达的变化

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【摘要】：目的动态观察不同阶段糖尿病大鼠和正常大鼠角膜上皮紧密连接蛋白claudin-1的表达变化。方法雄性SD大鼠80只,随机均等分为糖尿病组和正常对照组各40只,以高脂饮食联合小剂量STZ腹腔注射建立Ⅱ型糖尿病模型,分别于造模后4周、8周、16周处死大鼠,取角膜组织,以HE染色法比较糖尿病组和正常对照组大鼠角膜形态学变化,以免疫荧光染色和Western blot法检测并分析大鼠角膜上皮紧密连接蛋白claudin-1的表达变化。结果1.正常对照组大鼠与糖尿病组大鼠体质量的比较。高脂喂养8周后(注射STZ之前),正常对照组大鼠的平均体质量(381g)较糖尿病组大鼠(412g)低7.5%(P0.01),但在造模成功后正常对照组大鼠维持正常体质量增长,而糖尿病组大鼠体质量增长缓慢。造模成功后第4周时,糖尿病组大鼠平均体质量(418g)较正常对照组大鼠(447g)低6.4%(P0.01),第8周时,糖尿病组大鼠平均体质量(422g)较正常对照组(509g)低17.1%(P0.01),第16周时,糖尿病组大鼠平均体质量(428g)较正常对照组(566g)低24.4%(P0.01)。2.正常对照组大鼠与糖尿病组大鼠空腹血糖的比较。高脂喂养8周后(注射STZ之前),正常对照组大鼠的空腹血糖值约为5mmol/L,糖尿病组约为6mmol/L(P0.01),造模成功后糖尿病组大鼠空腹血糖浓度升高并维持在约21mmol/L,而正常对照组大鼠的空腹血糖仍为5mmol/L,两组间造模后第4周、8周、16周空腹血糖值差异均有统计学意义(P0.01)。3.造模成功后,HE染色分别观察并比较两组大鼠角膜形态学变化。任一时间点的正常对照组大鼠角膜形态无明显变化,各层清晰可见,排列整齐,均无水肿,角膜上皮细胞轮廓清楚,细胞核呈圆形,基质层排列紧密;糖尿病组大鼠角膜在第8周和第16周时,角膜上皮细胞排列疏松,细胞间隙增宽,细胞数量较正常减少,基质层水肿,胶原纤维排列不规则。4.角膜上皮通透性分析。染色结果显示造模后第4周、第8周和第16周,正常对照组和糖尿病组角膜屏障功能均正常,未观察到角膜上皮通透性有明显差别。5.免疫荧光染色分别检测并比较正常对照组与糖尿病组角膜上皮claudin-1蛋白的表达。染色发现claudin-1蛋白主要在角膜上皮的表层细胞和翼状细胞层表达。造模成功后第4周和第8周,未观察到两组间有明显差别。造模成功后第16周,染色结果显示糖尿病组的角膜上皮claudin-1蛋白表达较正常对照组明显更弱且不规则。6.Western blot检测大鼠角膜上皮claudin-1蛋白的表达量。分析造模后第4周和第8周正常对照组和糖尿病组大鼠角膜上皮claudin-1蛋白的表达,发现两组之间的表达量没有明显的区别(p0.05)。在造模后第16周可明显观察到糖尿病组大鼠角膜上皮claudin-1的表达量明显低于正常对照组的表达量(p0.05)。结论随糖尿病病程延长,Ⅱ型糖尿病可能导致大鼠角膜上皮紧密连接蛋白claudin-1表达降低。
【关键词】：糖尿病角膜上皮紧密连接蛋白 claudin-1 免疫荧光染色 Western blot
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R587.2;R772.2
【目录】：

• 英文缩写一览表5-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 1. 前言10-13
• 2. 材料与方法13-21
• 3. 结果21-26
• 4. 讨论26-28
• 5. 结论28
• 6. 参考文献28-33
• 附录33-34
• 致谢34-35
• 综述35-49
• 参考文献41-49

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