视网膜色素上皮细胞吞噬功能与MERTK-Ras-肌球蛋白通路关系的研究

发布时间：2017-07-26 05:17

  本文关键词：视网膜色素上皮细胞吞噬功能与MERTK-Ras-肌球蛋白通路关系的研究

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【摘要】：目的:研究视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞吞噬功能与MERTK受体及其下游信号通路Ras-MEK-MLCK-肌球蛋白的关系。方法:用视细胞外节膜盘(rod outer segments,ROS)于37℃孵育离体培养的3~5代C57小鼠RPE细胞,在孵育0、30、60、120、180、240min终止吞噬反应。双重荧光标记法检测RPE细胞吞噬动力学;以MERTK及Ras抗体、磷酸化MEK及MLCK抗体应用Western-Blot方法检测不同孵育时间(30、60、120、180min)MERTK、Ras、MEK及MLCK的激活状态;以瞬时转染质粒方法抑制Ras及MERTK基因表达后,再次以Western-Blot方法检测对应时间MERTK-Ras通路激活状态及吞噬功能的变化。结果:C57小鼠RPE细胞吞入ROS发生在孵育30min,并在3h达到饱和。在吞噬过程中,随着孵育时间的延长,RPE细胞MERTK、Ras、MEK和MLCK的蛋白表达水平不断增多(与对照组相比,P0.05)。Ras及MERTK干扰后的RPE细胞与ROS共孵育(30、60、120、180min)的全过程中,MERTK、Ras、MEK和MLCK的蛋白表达及ROS的吞人数量始终维持较低水平,仅在孵育180min见到少量ROS吞入;与未转染RPE细胞相比,siRas-RPE细胞及siMERTK-RPE细胞与ROS共孵育120、180min时,MERTK、Ras、MEK及MLCK的蛋白表达量均明显减少(P0.05)。结论:Ras-MEK-MLCK-肌球蛋白通路是鼠RPE细胞吞噬过程中MERTK受体激活的下游信号通路。
【作者单位】： 中国医科大学附属一院眼科;
【关键词】： 视网膜色素上皮 吞噬 MERTK Ras 肌球蛋白
【基金】：沈阳市科技计划项目(No.F13-316-1-11)~~
【分类号】：R774.1
【正文快照】： Liaoning Province,China.sunyz91667@sina.com妁METHODS:Cultured 3~5 passage RPE cells of C57BL/6m ouse w ere incubated w ith rod outer segm ents(ROS)suspension(containing ROS 1×107/m l)at 37℃,then cellsw ere rinsed at different tim es(30,60,120,180,240m ，

本文编号：574864