多奈哌齐延缓MNU诱导的小鼠感光细胞凋亡及其机制的研究

发布时间：2017-08-12 18:04

  本文关键词：多奈哌齐延缓MNU诱导的小鼠感光细胞凋亡及其机制的研究

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【摘要】：目的:本研究旨在研究多奈哌齐在视网膜中对MNU诱导的感光细胞凋亡抑制作用的机制。方法:雄性C57BL/6小鼠腹腔注射MNU(60mg/kg),分别在第1天,第3天,第5天,第7天处死,取眼球进行HE染色观察视网膜各层形态。小鼠玻璃体腔注射热休克蛋白抑制剂Ⅰ,灌胃给予多奈哌齐10mg/kg预处理3天后处死,取眼球做免疫荧光检测,免疫荧光观察Hsp70的表达与定位情况。对小鼠分别灌胃给予不同剂量的多奈哌齐(1 mg/kg、5 mg/kg、10mg/kg)预处理3天后处死小鼠,取眼球进行蛋白印迹检测。对小鼠在不同时间点(1天,3天,5天)灌胃给予较高剂量多奈哌齐(10mg/kg)处死小鼠取眼球进行蛋白印迹检测,观察多奈哌齐诱导Hsp70表达的剂量和时间依赖性。另外小鼠玻璃体腔注射热休克蛋白抑制剂Ⅰ及灌胃给予Bcl-2抑制剂,利用蛋白印迹技术检测Hsp70,Bcl-2的表达情况,同时利用流式细胞术检测感光细胞凋亡的情况。结果:1、HE染色发现腹腔注射MNU后视网膜外核层显著变薄,高峰在第3天,第7天变得更薄,外丛状层在第1,3,5,7天后开始逐渐变薄,然而内核层在第5,7天后才开始变薄,神经节细胞层在各个时间段都没有显著变化。2、免疫荧光检测发现对照组Hsp70在感光细胞内节和外核层有微弱的表达,当给予多奈哌齐预处理3天后,Hsp70表达显著增强,热休克蛋白抑制剂使Hsp70的表达显著减弱。3、蛋白印迹分析表明多奈哌齐(5,10 mg/kg)组与对照组(0 mg/kg)相比,Hsp70的表达显著增加;多奈哌齐(第3,5天)组与对照组(第0天)相比,Hsp70的表达高峰在第3天组。4、蛋白印迹分析发现多奈哌齐诱导Hsp70和Bcl-2的表达增强,热休克蛋白抑制剂抑制使Hsp70和Bcl-2的表达显著减弱,Bcl-2抑制剂明显减弱Bcl-2的表达,但对Hsp70的表达无明显影响,差异具有统计学意义(P0.01)。5、HE染色发现与MNU组相比,多奈哌齐+MNU组的视网膜外核层显著增厚,然而热休克蛋白抑制剂+多奈哌齐+MNU组视网膜外核层显著变薄。流式细胞分析发现对照组凋亡率为6.4±4.1%,MNU组为43.2±7.4%,多奈哌齐+MNU组为29.4±4.1%,热休克蛋白抑制剂+多奈哌齐+MNU组为40.6±2.3%,差异具有统计学意义(P0.01)。结论:1、小鼠腹腔注射MNU可以显著并且选择性诱导感光细胞凋亡。2、多奈哌齐能诱导Hsp70的表达,同时存在剂量和时间依赖性,另外,多奈哌齐能上调Bcl-2的表达。3、多奈哌齐对感光细胞具有保护作用,其保护机制可能是通过Bcl-2抑制凋亡实现的,并且Hsp70可能是Bcl-2上游抑制凋亡的一个重要因素。
【关键词】：多奈哌齐 感光细胞 MNU Hsp70 Bcl-2
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R774.1
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 中英文缩略词表9-10
• 第1章 前言10-12
• 第2章 材料与方法12-22
• 2.1 材料12-17
• 2.1.1 动物和分组12-13
• 2.1.2 抗体13
• 2.1.3 免疫荧光13-14
• 2.1.4 蛋白免疫印迹14
• 2.1.5 溶液配制14-16
• 2.1.6 实验仪器16-17
• 2.2 实验方法17-21
• 2.2.1 石蜡切片17-18
• 2.2.2 苏木紫伊红染色法（HE染色）18
• 2.2.3 免疫荧光法18-19
• 2.2.4 蛋白免疫印迹19-21
• 2.2.5 流式细胞术21
• 2.3 统计学分析21-22
• 第3章 结果22-28
• 3.1 腹腔注射MNU诱导感光细胞的凋亡22-23
• 3.2 多奈哌齐诱导Hsp70的表达23
• 3.3 多奈哌齐诱导Hsp70表达的剂量和时间依赖23-24
• 3.4 多奈哌齐诱导Hsp70表达与Bcl-2 有关24-25
• 3.5 多奈哌齐通过上调Hsp70来减少MNU诱导的感光细胞凋亡25-28
• 第4章 讨论28-31
• 第5章 结论31-32
• 致谢32-33
• 参考文献33-36
• 综述 视网膜感光细胞凋亡和保护的研究36-43
• 参考文献41-43

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 徐学君;徐德琴;汪骏;;多奈哌齐的药理作用及其临床应用研究进展[J];安徽医药;2009年04期

2 李宁东;视网膜色素变性的分子发病机制[J];国外医学.眼科学分册;2003年06期

3 李虹,李华林,李婉宜,肖丽英,蒋中华,李明远,汪晓东,张林;流感病毒诱导肿瘤细胞凋亡及其机制的研究[J];四川大学学报(医学版);2003年03期

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本文编号：662896