532nm激光诱导形觉剥夺性高度近视豚鼠脉络膜新生血管模型的研究

发布时间：2017-08-21 02:38

  本文关键词：532nm激光诱导形觉剥夺性高度近视豚鼠脉络膜新生血管模型的研究

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【摘要】：目的构建高度近视豚鼠脉络膜新生血管(choroidal neovascularization,CNV)模型,研究模型中新生血管的发生发展规律,并探讨micro RNA-21(miR-21)、VEGF、HIF-1α、MMP-2及TIMP-2等因子在高度近视CNV中的作用。方法(1)20只2周龄三色豚鼠随机分为形觉剥夺组(n=12)和正常对照组(n=8),其中形觉剥夺组豚鼠右眼进行遮盖。于形觉剥夺前、形觉剥夺后4、6、10、14周分别对两组豚鼠双眼进行屈光度和眼轴长度测量。通过眼底彩照、FFA、OCT及病理组织学检查分析形觉剥夺14周后各组视网膜、脉络膜和巩膜厚度及其形态结构的变化。(2)60只2周龄三色豚鼠随机分为实验组(n=30)与对照组(n=30),实验组右眼形觉剥夺诱导高度近视。两组各选取25只豚鼠右眼采用高能量、短曝光时间的532nm激光光凝视网膜诱导CNV。两组于激光前、光凝后7d、14d、21d、28d、35d进行眼底彩照、FFA、OCT、HE染色检查,观察高度近视豚鼠CNV的发生发展规律,并对两组FFA所得4级光斑荧光素平均渗漏面积、OCT及HE染色所得平均CNV厚度进行统计分析。(3)36只2周龄三色豚鼠随机分为实验组(n=18)与对照组(n=18),实验组右眼形觉剥夺诱导高度近视。两组各选取15只豚鼠右眼行激光光凝视网膜诱导CNV。两组于激光前、光凝后7d、14d、21d、28d、35d进行免疫组织化学检查观察光凝区域HIF-1α、VEGF的表达,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测RPE-脉络膜-巩膜复合物miR-21和HIF-1α、VEGF m RNA表达,并对阳性表达的积分光密度值和m RNA相对表达量进行统计分析。(4)两组豚鼠分别于激光前、光凝后7d、14d、21d、28d、35d进行免疫组织化学检查观察MMP-2和TIMP-2的表达,RT-PCR检测RPE-脉络膜-巩膜复合物MMP-2和TIMP-2 m RNA表达,并对阳性表达的积分光密度值和m RNA相对表达量进行统计分析。结果(1)豚鼠形觉剥夺后随观察时间延长剥夺眼近视屈光度逐渐增高,10周后可达-10.00D以上的超高度近视,14周后近视度数更高,平均屈光度为-16.48±2.14D,个别眼可达-20.00D。眼轴长度及玻璃体腔深度也相应延长。形觉剥夺超高度近视眼视网膜、脉络膜和巩膜较对照组均明显变薄且形态结构发生病理性改变。(2)FFA、OCT及HE染色检查显示高度近视组CNV于光凝后7d出现,21d达到高峰,35d略有减少;对照组CNV于光凝后14d形成,21d达到高峰,35d明显减少。光凝后各观察时间点,高度近视组4级光斑荧光素平均渗漏面积及平均CNV厚度明显高于对照组,差异具有统计学意义(p值均0.05);21d与35d两组分别组内比较显示,高度近视组无显著性差异(p0.05),而对照组差异具有统计学意义(p0.05)。(3)免疫组化及PCR结果显示光凝后高度近视组和对照组miR-21、HIF-1α、VEGF表达均明显上调,miR-21于光凝后7d、HIF-1α、VEGF于光凝后14d时分别达到表达高峰。各观察时间点高度近视组HIF-1α、VEGF阳性表达的积分光密度值均明显高于对照组,差异具有统计学意义(p值均0.05);HIF-1α、VEGF m RNA和miR-21相对表达量也均较对照组有不同程度的升高。(4)免疫组化及PCR结果显示光凝后高度近视组和对照组MMP-2和TIMP-2表达均明显上调,MMP-2于光凝后21d、TIMP-2于光凝后28d时表达高峰。激光前及光凝后各观察时间点,高度近视组MMP-2阳性表达的积分光密度值和m RNA相对表达量均明显高于对照组,差异具有统计学意义(p值均0.05);而激光前高度近视组TIMP-2表达较对照组明显减少(p0.05),光凝后各时间点两组TIMP-2表达无显著性差异(p值均0.05)。结论(1)应用遮盖法对低龄豚鼠进行长期单眼形觉剥夺可诱导超高度近视形成,10周后达-10.00D以上;超高度近视眼视网膜、脉络膜和巩膜明显变薄,脉络膜和巩膜结构紊乱,视网膜结构中外层变薄最为显著,感光细胞受损,推测其对超高度近视的发生起重要作用。(2)应用532nm激光可诱导高度近视豚鼠CNV形成并可作为病理性高度近视的实验研究模型,该模型具备荧光素持续渗漏时间可达1月之久的形态学特点。高度近视CNV较对照组形成早、退变慢,新生血管发生率及发生程度更高。(3)miR-21、VEGF、HIF-1α与高度近视CNV形成密切相关,且可能互相作用共同促进高度近视CNV的形成。miR-21作为一种促血管生成基因可能通过HIF-1α-VEGF信号通路间接促进高度近视CNV的形成。(4)MMP-2和TIMP-2与高度近视CNV形成密切相关,MMP-2与TIMP-2表达平衡紊乱可能参与高度近视CNV的发生发展。
【关键词】：高度近视 脉络膜新生血管 豚鼠 病理组织学 microRNA-21 低氧诱导因子-1 血管内皮生长因子 基质金属蛋白酶 基质金属蛋白酶抑制剂
【学位授予单位】：上海交通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R778.11
【目录】：

• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-13
• 英文缩写索引13-14
• 绪论14-17
• 第一部分 豚鼠行觉剥夺性超高度近视模型的建立及形态学研究17-29
• 1 实验材料17-18
• 2 实验方法18-21
• 3 结果21-25
• 4 讨论25-28
• 5 章节小结28-29
• 第二部分 高度近视豚鼠脉络膜新生血管模型的建立及评估29-39
• 1 实验材料29
• 2 实验方法29-31
• 3 结果31-36
• 4 讨论36-38
• 5 章节小结38-39
• 第三部分 MicroR-21、HIF-1α、VEGF在高度近视豚鼠脉络膜新生血管模型中的表达分析39-53
• 1 实验材料40-41
• 2 实验方法41-45
• 3 结果45-50
• 4 讨论50-52
• 5 章节小结52-53
• 第四部分 MMP-2、TIMP-2 在高度近视豚鼠脉络膜新生血管模型中的表达分析53-60
• 1 实验材料53-54
• 2 实验方法54
• 3 结果54-58
• 4 讨论58-59
• 5 章节小结59-60
• 全文总结60
• 问题及展望60-61
• 参考文献61-69
• 致谢69-70
• 攻读硕士学位期间已发表的论文70

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7 李，

本文编号：710382