当前位置:主页 > 医学论文 > 五官科论文 >

MiR-145通过靶向作用于Smad3抑制鼻咽癌的侵袭和转移能力

发布时间:2017-09-08 14:00

  本文关键词:MiR-145通过靶向作用于Smad3抑制鼻咽癌的侵袭和转移能力


  更多相关文章: 词词::鼻咽癌 miR-145 Smad3 侵袭


【摘要】:背景与目的的:鼻咽癌是头颈外科肿瘤中常见的癌症,具有高度的转移能力,在亚洲地区较为流行,特别是在中国南方。随着表观遗传学的不断发展,近年来mi RNA在多种肿瘤中的各种生物学作用越来越受到科研工作者的重视。mi R-145被报道在多种肿瘤中发挥抑制肿瘤的作用,并且已有报道mi R-145在鼻咽癌组织中明显低表达,但其功能仍未有报道。本研究旨在验证mi R-145在鼻咽癌组织标本及鼻咽癌细胞中的表达情况,通过探讨鼻咽癌中mi R-145的生物学功能及其可能的调控机制,为鼻咽癌的诊断和治疗提供确凿的实验依据和新的方向。方法:(1)采用Real-Time PCR和Western Blot方法分别检测在人永生化的鼻咽部上皮细胞NP69和3株鼻咽癌细胞(CNE-1、CNE-2和CNE-2Z)以及11对鼻咽癌组织样本中mi R-145的表达水平。(2)将mi R-145的模拟体mi R-145 mimics(mi R-NC)和抑制剂mi R-145 inhibitor(mi R-NC inhibitor)转染至高转移的鼻咽癌细胞株(CNE-2和CNE-2Z)中,通过CCK-8实验观察细胞的增殖情况,以及Transwell实验了解其对细胞迁移、侵袭的影响。(3)生物信息学软件Target Scan、Pic Tar和mi Randa对mi R-145的靶基因进行预测,初步筛选出目的基因Smad3。运用双荧光素酶活性检测实验验证相关mi R-145是否与Smad33’UTR区域的种子序列直接靶向结合,验证靶基因。在鼻咽癌细胞株中过表达和抑制表达mi R-145后检测Smad3 m RNA和蛋白表达水平。(4)将si-Smad3(si-NC)转染至鼻咽癌细胞中,使用Western Blot技术检测Smad3的蛋白表达情况,以确保干扰Smad3的效果,通过CCK-8方法观察细胞的增殖情况,及应用Transwell试验了解其对细胞迁移、侵袭的影响。(5)q RT-PCR方法检测在人永生化的鼻咽部上皮细胞NP69和3株鼻咽癌细胞以及11对鼻咽癌组织样本中Smad3的表达情况,并将其和mi R-145的表达作回归分析,统计出鼻咽癌中mi R-145和Smad3表达的相关性。结果:(1)与NP69相比,mi R-145在鼻咽癌细胞株CNE-1、CNE-2和CNE-2Z的表达均是明显下调的;同样,与11例鼻咽部非肿瘤组织相比,11例鼻咽癌组织样本中mi R-145表达下调。综上所述,mi R-145在鼻咽癌中低表达。(2)在转染mi R-145mimics后CNE-2和CNE-2Z细胞株细胞增殖明显减慢,细胞的迁移及侵袭能力显著下降。而在转染mi R-145 inhibitor后,呈现出相反的结果。(3)生物信息学软件预测分析出可能与mi R-145特异结合的靶基因的3’UTR区,通过瞬时转染mi R-145 mimics(mi R-NC)和mi R-145 inhibitor(mi R-NC inhibitor)检测靶基因在m RNA和蛋白水平的表达改变情况以及双荧光素酶报告基因实验验证,最后得出Smad3作为mi R-145的目的基因成为本次研究的靶基因。(4)将si-Smad3转染到CNE-2和CNE-2Z细胞株后,我们发现Smad3的蛋白表达水平明显下降,表明si-Smad3成功地干扰了Smad3的表达,生物学功能实验结果显示转染si-Smad3后细胞增殖未见明显变化,细胞的迁移及侵袭能力下降。表明鼻咽癌中Smad3可能主要发挥促进鼻咽癌转移的作用。(5)与NP69相比,在鼻咽癌细胞株CNE-1、CNE-2和CNE-2Z中Smad3的表达明显上调;在11例鼻咽癌组织样本中检测得到Smad3的表达与11例鼻咽部非肿瘤组织相比也是上调的。也就是说,在鼻咽癌中Smad3是高表达的。将其和mi R-145的表达作回归分析发现鼻咽癌中两者的表达之间是呈负相关。结论:本实验表明mi R-145在人鼻咽癌中呈现低表达水平,通过发挥抑制鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭能力,进而发挥抑制肿瘤的作用。利用生物信息学和双荧光实验等方法发现并验证mi R-145的直接靶基因Smad3。干扰Smad3后鼻咽癌的迁移和侵袭能力明显受到了抑制,与mi R-145作用结果相一致;Smad3在鼻咽癌组织和细胞中高表达,与mi R-145之间呈现负相关,进一步证实了mi R-145可以通过特异性结合Smad3的3’UTR区发挥抑制鼻咽癌侵袭和转移的作用。为进一步深入研究鼻咽癌的发病机制及诊断治疗鼻咽癌提供了科学的理论基础。
【关键词】:词词::鼻咽癌 miR-145 Smad3 侵袭
【学位授予单位】:苏州大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2015
【分类号】:R739.63
【目录】:
  • 摘要4-6
  • Abstract6-10
  • 前言10-17
  • 参考文献14-17
  • 第一部分 mi R-145在鼻咽癌中的表达及对细胞增殖、迁移和侵袭的影响17-32
  • 引言17-18
  • 材料与方法18-26
  • 结果26-32
  • 第二部分 mi R-145靶基因的预测及验证,靶基因功能的研究及两者之间的关系32-52
  • 引言32-33
  • 材料与方法33-45
  • 结果45-52
  • 全文总结52-54
  • 全文讨论54-57
  • 参考文献57-61
  • 综述 头颈肿瘤中mi RNA研究进展61-67
  • 参考文献64-67
  • 缩略词表67-68
  • 攻读硕士学位发表的论文68-69
  • 致谢69-70

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 陈伟 ,付小兵 ,盛志勇;Review of current progress in the structure and function of Smad proteins[J];Chinese Medical Journal;2002年03期

2 王启伟;Smad蛋白信号网络[J];国外医学(分子生物学分册);2003年04期

3 张远强,胡静,刘新平,许若军;EXPRESSION AND LOCALIZATION OF SMAD4 PROTEIN IN RAT TESTIS DURING THE POSTNATAL DEVELOPMENT[J];Chinese Medical Sciences Journal;2003年03期

4 徐新保,冷希圣,何振平,梁志清,林凯,魏玉华,于鑫,彭吉润;Inhibitory effect of retroviral vector containing anti-sense Smad_4 gene on Ito cell line, LI90[J];Chinese Medical Journal;2004年08期

5 郑启新;王运涛;郭晓东;;Wild-type Smad3 Gene Enhances the Osteoblastic Differentiation of Rat Bone Marrow-derived Mesenchymal Stem Cells in Vitro[J];华中科技大学学报(医学英德文版);2005年06期

6 王运涛,郑启新,郭晓东,吴永超,郝杰;Influence of Exogenous TGFβ_1 on the Expression of Smad2 and Smad3 in Rat Bone Marrow-derived Mesenchymal Stem Cells[J];华中科技大学学报(医学英德文版);2005年01期

7 ;HSP70 decreases receptor-dependent phosphorylation of Smad2 and blocks TGF-β-induced epithelial-mesenchymal transition[J];遗传学报;2011年03期

8 ;Berbamine inhibits proliferation and induces apoptosis of KU812 cells by increasing Smad3 activity[J];Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology);2011年07期

9 尚政军;修复相关基因Smad3的研究进展[J];国外医学(分子生物学分册);2001年05期

10 杨晓 ,孙彦洵 ,周江 ,黄培堂 ,黄翠芬 ,徐晓玲 ,李翠玲 ,GotayJessica ,陈林 ,邓初夏;Establishment of murine Smad5 double knockout ES cells and the studies on their properties[J];Science in China(Series C:Life Sciences);2001年02期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 霍艳英;李刚;胡迎春;周平坤;吴德昌;;THE SIGNIFICANCE OF SMAD7 IN TGF-β-MEDIATED SMADS AND ERK/MAPK SIGNAL PATHWAY IN RADIATION-INDUCED TUMORIGENIC HUMAN BRONCHIAL EPITHELIAL CELLS[A];海峡两岸第三届毒理学研讨会论文摘要[C];2005年

2 张素平;张然;陈峰;张丽霞;陈晔光;;Smad7 antagonises TGF-β signaling in the nucleus[A];中国细胞生物学学会2005年学术大会、青年学术研讨会论文摘要集[C];2005年

3 王剑;杨晓;;Gene expression profile in cardiomyocyte-specific Smad4 knock-out mice[A];中国遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会论文摘要汇编(2004-2008)[C];2008年

4 刘昭廷;王强;孟安明;;基因组水平上受斑马鱼Smad2调控的靶基因[A];“细胞活动 生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会论文摘要集[C];2011年

5 ;HSP70 decreases receptor-dependent phosphorylation of Smad2 and blocks TGF-β-induced epithelial-mesenchymal transition[A];“细胞活动 生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会论文摘要集[C];2011年

6 ;Maternal Smad3 Deficiency Compromises Decidualization in Mice[A];“细胞活动 生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会论文摘要集[C];2011年

7 Jingmin Zhao;Jia Wang;Jun Yu;;Inhibitory role of Smad7 in hepatocarcinogenesis in mice and in vitro[A];中华医学会第十六次全国病毒性肝炎及肝病学术会议论文汇编[C];2013年

8 Bensoussan D.;Stoltz J.F.;de Isla N;;Differentiation of human bone marrow mesenchymal stem cells induced by biaxial tension involves Smad3 activation[A];中国生理学会第23届全国会员代表大会暨生理学学术大会论文摘要文集[C];2010年

9 ;Function of TGF-β/Smad4 Signaling in the Maintenance of Tissue Homeostasis[A];中国的遗传学研究——遗传学进步推动中国西部经济与社会发展——2011年中国遗传学会大会论文摘要汇编[C];2011年

10 杨晓;;Targeted disruption of Smad4 in mouse epidemis results in failure of hair follicle cycling and formation of skin tumors[A];中国遗传学会七届一次青年研讨会暨上海高校模式生物E——研究院第一届模式生物学术研讨会论文汇编[C];2005年

中国重要报纸全文数据库 前2条

1 记者 李天舒;先天性心脏病病因被发现[N];健康报;2009年

2 通讯员 俞志新 记者 李水根;骨碎补总黄酮可以促进骨形成[N];健康报;2010年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 黎锦;氨氯地平通过调节Smad的表达防止肾脏纤维化[D];武汉大学;2014年

2 张俊文;TGF-β信号通路中两个与TβRI相互作用蛋白的功能研究[D];北京协和医学院;2012年

3 霍艳英;在辐射诱发人支气管上皮细胞发生恶性转化过程中Smad7基因的作用机制研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2003年

4 于鸿;Smad7过表达对大鼠肾小球系膜细胞基质代谢的影响[D];复旦大学;2004年

5 齐心;Smad4在维持胚胎心脏增殖中的作用研究[D];南京大学;2010年

6 孙彦洵;Smad5基因在小鼠胚胎干细胞增殖、分化及凋亡中的功能与机制[D];中国人民解放军军事医学科学院;2005年

7 贺文芳;Smad2在氧糖剥夺再灌注损伤中的表达及其作用机制研究[D];中南大学;2012年

8 肖炜;肾康丸对糖尿病肾病TGF-β_1/Smad信号通路的影响[D];第一军医大学;2006年

9 王惕;慢病毒介导Smad7基因对角膜增殖与纤维化的抑制作用[D];复旦大学;2010年

10 徐业芬;Smad信号转导通路相关基因表达与湖羊高繁殖力关系的研究[D];南京农业大学;2010年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 林琳;SnoN蛋白在RPE细胞TGF-β/Smad信号通路中的作用[D];福建医科大学;2015年

2 丁雪峰;芪苈强心提取物阻断Smad3信号通路抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心脏成纤维细胞转分化的机制研究[D];川北医学院;2015年

3 李祥亭;N-乙酰半胱氨酸对大鼠肺纤维化模型肺组织Smad家族基因表达的影响[D];遵义医学院;2015年

4 李鑫静;Smad4、Kindlin-2和Anxa2基因在胃癌组织中的表达及临床病理意义[D];福建医科大学;2015年

5 汪呈;靶向Smurf1 HECT结构域的小分子抑制剂的细胞学水平验证[D];石河子大学;2015年

6 田茜华;补肾法、疏肝法对体外培养IVF-ET患者卵巢颗粒细胞中ACTA及其Smads信号通路的影响[D];河北医科大学;2015年

7 李春杰;新生大鼠高氧性肺损伤肺组织中Smad3及PPAR-γ的蛋白和mRNA表达及罗格列酮的干预作用[D];苏州大学;2015年

8 孙景英;CXCL9和Smad3的表达与新疆维吾尔族银屑病发病关系的研究[D];石河子大学;2015年

9 黄海平;MiR-145通过靶向作用于Smad3抑制鼻咽癌的侵袭和转移能力[D];苏州大学;2015年

10 刘昌伟;Smad2通过抑制TGF-β1/Smad3介导的胶原合成在肝纤维化中起保护作用[D];安徽医科大学;2015年



本文编号:814419

资料下载
论文发表

本文链接:https://www.wllwen.com/yixuelunwen/wuguanyixuelunwen/814419.html


Copyright(c)文论论文网All Rights Reserved | 网站地图 |

版权申明:资料由用户dd26d***提供,本站仅收录摘要或目录,作者需要删除请E-mail邮箱bigeng88@qq.com