广州地区鼻咽癌和健康人群中EB病毒BARF1和vIL-10基因多态性研究

发布时间：2017-09-08 14:18

  本文关键词：广州地区鼻咽癌和健康人群中EB病毒BARF1和vIL-10基因多态性研究

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【摘要】：背景和目的EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)BARF1基因具有致癌潜能,在多数EBV相关上皮性肿瘤中表达,在上皮性肿瘤中可能发挥重要作用。EBV BCRF1基因编码的病毒白介素IL-10(v IL-10)与人IL-10(h IL-10)有高度同源性,具有免疫抑制活性,在EBV免疫逃逸和维持病毒的潜伏感染过程中发挥作用。我们以往对山东地区鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)、EBV相关胃癌和健康人群EBV基因多态性的检测表明不同人群中BARF1和v IL-10基因变异存在一定的差异。本研究旨在了解我国NPC高发区广州地区NPC和健康人群中BARF1和v IL-10基因变异特征,通过广州地区和山东地区实验数据的对比分析,进一步探讨BARF1和v IL-10基因变异与NPC的相关性,为最终明确EBV基因多态性与EBV相关肿瘤的关系提供实验依据。方法收集NPC高发区广州地区NPC组织标本和健康人群咽漱液(Throat washing,TW)标本,提取DNA,采用PCR和DNA测序分别检测BARF1和v IL-10基因序列,应用DNAStar软件对BARF1和v IL-10基因核苷酸及氨基酸(Amino acid,aa)序列进行对比分析,应用MEGA软件绘制系统进化树,同时与EBV标准株B95-8序列比较,根据两种基因出现的特征性改变对变异进行分类。比较NPC和健康人群之间以及广州地区和山东地区之间BARF1和v IL-10基因变异型的分布情况。同时采用PCR结合酶切检测EBV Bam HI F片段(F/f分型),并对Bam HI F、BARF1和v IL-10基因变异进行连锁分析。结果①广州地区50例NPC和73例健康人群标本成功扩增BARF1基因并进行测序。根据系统进化树及特征性突变,出现共有错义突变V29A的序列被分类为V29A变异型,与标准株B95-8 aa序列一致但出现共有同义突变t165545c(aa14)的被分类为B95-8t42c,与标准株B95-8 DNA序列一致或仅出现散在突变的被分类为B95-8P型。广州地区NPC中B95-8t42c的检出率(76.0%,38/50)高于健康人群(50.7%,37/73),差异有显著性(χ2=7.992,P=0.005)。广州地区NPC中B95-8t42c的检出率高于山东地区NPC(26.4%,24/91),而V29A的检出率(4.0%,2/50)低于山东地区(23.1%,21/91),差异有显著性(χ2=32.856,P0.0001);广州地区健康人群中B95-8t42c的检出率高于山东地区(7.6%,6/79),差异有显著性(χ2=34.726,P0.0001)。②广州地区50例NPC和70例健康人群标本成功完成v IL-10基因测序。42例(84.0%,42/50)NPC和60例(85.7%,60/70)健康人群标本与B95-8 aa序列一致,分类为B95-8型;而8例(16.0%,8/50)NPC和10例(14.3%,10/70)健康人群标本在信号肽区域发生aa突变,分类为SPM变异型。广州地区NPC和健康人群之间v IL-10变异类型的分布无显著性差异(χ2=0.067,P=0.795)。广州地区v IL-10变异特点与山东地区类似,两地区NPC之间以及健康人群之间v IL-10基因变异类型的分布均无显著性差异(NPC:P=0.073;健康人群:P=0.691)。③广州地区NPC中f型EBV的检出率(70.9%,39/55)高于健康人群(39.4%,28/71),差异有显著性(χ2=12.329,P=0.0004)。对F/f分型、BARF1和v IL-10变异均成功检测且均为单一基因型的样本序列连锁分析发现了12种不同的连锁基因型,其在NPC和健康人群之间的分布及两地区之间的分布均不同(P0.0001)。Type f/B95-8c42t/B95-8在广州地区NPC中的比率(62.0%,31/50)高于健康人群(32.8%,21/64),亦高于山东地区NPC(1.2%,1/81)。F型和f型EBV毒株中BARF1/v IL-10基因型的分布不同(P0.0001),广州地区f型EBV主要对应B95-8t42c/B95-8,占91.2%(52/57),而F型EBV则对应多种变异类型。结论①广州地区NPC和健康人群中BARF1基因变异与山东地区存在一定差异。B95-8t42c变异型是广州地区BARF1的主要型别,可能与NPC尤其是高发区NPC相关。②广州地区NPC和健康人群中v IL-10基因变异与山东地区类似,B95-8型是广州地区v IL-10的主要型别,v IL-10变异可能与NPC无关。③Bam HI F、BARF1和v IL-10基因变异存在关联性,广州地区f型EBV主要对应B95-8t42c/B95-8基因型,Type f/B95-8t42c/B95-8连锁基因型在广州地区NPC检出率高,提示其与NPC相关。
【关键词】：EB病毒 BARF1 vIL-10 鼻咽癌 基因多态性
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R739.63
【目录】：

• 摘要2-4
• Abstract4-7
• 引言7-9
• 第一章 材料与方法9-14
• 1.1 仪器、试剂和耗材9
• 1.2 研究对象9-10
• 1.3 核酸提取10-12
• 1.4 BARF1和vIL-10基因序列多态性检测12-13
• 1.5 BamHI F片段F/f分型检测13
• 1.6 统计学分析13-14
• 第二章 结果14-28
• 2.1 BARF1序列多态性14-22
• 2.2 vIL-10基因序列多态性22-24
• 2.3 F/f分型检测结果及与山东地区的比较24-25
• 2.4 BamHI F、BARF1和vIL-10基因变异连锁分析25-28
• 第三章 讨论28-33
• 研究结论33-34
• 参考文献34-38
• 综述38-51
• 参考文献45-51
• 攻读学位期间的学术成果51-52
• 致谢52-53

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 李友琼;张雪怡;曾健;陈巧林;李良菊;成静;訾瑞峰;周天戟;;EB病毒BARF1基因表达对胃癌细胞株SGC7910生物学行为的影响[J];江苏大学学报(医学版);2009年03期

中国硕士学位论文全文数据库 前1条

1 于传亭;EB病毒编码的病毒白介素-10基因多态性研究[D];青岛大学;2013年

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本文编号：814512