18β-甘草次酸对脂多糖诱导鼻黏膜炎症的影响

发布时间：2017-09-17 04:04

  本文关键词：18β-甘草次酸对脂多糖诱导鼻黏膜炎症的影响

  更多相关文章： 鼻息肉 沉默信号调节因子6 高迁移率族蛋白1 18-β甘草次酸 脂多糖

【摘要】：鼻息肉(nasal polyps, NP)是鼻腔鼻窦黏膜组织高度水肿的慢性炎性病变,常伴有慢性鼻-鼻窦炎,多数学者多倾向认为黏膜的慢性炎性反应是由多因素如细菌、真菌、解剖变异等诱发鼻腔外侧壁黏膜炎症所致。炎症是对创伤和感染的生理性和保护性反应,而炎性细胞的长期浸润可促使细胞因子(如HMGB1、TNF-α、IL-5、IL-8等)相互作用,鼻黏膜局部炎症反应不断扩大。HMGB1属非组蛋白核蛋白,参与细胞分化、DNA的转录、复制与修复等,属细胞核的成分,在胞外时发挥着炎症因子的作用。在鼻息肉组织中HMGB1表达水平较正常鼻黏膜组织增高,LPS诱导可促使细胞核内的HMGB1主动释放至细胞质及细胞外。沉默信息调节因子是依赖于烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的第三类组蛋白去乙酰化酶,Sirtuins蛋白家族参与炎症机制的上游信号通路,在呼吸道细胞的细胞衰老、病原感染中发挥着重要的作用。本研究通过观察鼻息肉组织和正常鼻黏膜组织中Sirt6 (silent information regulator 2 related enzyme 6)的表达,脂多糖诱导体外原代鼻黏膜上皮细胞后18β-甘草次酸对Sirt6 和 HMGB1的影响情况,以初步探讨Sirt6蛋白在正常鼻黏膜和鼻息肉中的作用,18β-甘草次酸是否在鼻黏膜上皮细胞中发挥抗炎机制。第一部分沉默信号调节因子6在鼻息肉中的表达及意义目的：初步探讨Sirt6在慢性鼻窦炎伴鼻息肉中的表达及意义。方法：利用免疫组化和Westem blot方法观察23例鼻息肉组织及8例正常鼻黏膜组织中Sirt6蛋白分布和表达水平。结果：1.免疫组化显示Sirt6在鼻黏膜主要表达在上皮细胞胞核、间质细胞及腺细胞,在鼻息肉中的表达弱于正常鼻黏膜;2.Westem blot显示Sirt6在鼻息肉中的表达量低于正常鼻黏膜。结论：Sirt6蛋白主要表达在正常鼻黏膜细胞,其水平的降低可能参与鼻息肉的炎性反应,可作为慢性鼻窦炎伴鼻息肉的治疗指标。第二部分18p-甘草次酸对脂多糖诱导鼻黏膜炎症的影响目的：观察18p-甘草次酸(GA)对脂多糖(LPS)诱导的鼻黏膜上皮细胞炎症的影响。方法：收集鼻息肉标本8例,所取标本的患者年龄在19-60岁之间,排除真菌性鼻窦炎、过敏性鼻炎、哮喘、鼻息肉复发再次手术者及其他全身性疾病及免疫学检查异常患者。术前停用糖皮质激素、抗组胺等药物治疗两周。LPS诱导原代培养的人鼻息肉上皮细胞48 h后,更换含18p-甘草次酸培养基作用48 h,荧光显微镜下观察Sirt6及HMGB1蛋白在细胞中的表达及细胞形态变化,Western blot检测蛋白的表达量。结果：GA药物组与空白对照组及LPS诱导原代培养的人鼻息肉上皮细胞48h后相比,HMGB1表达局限于胞核,Sirt6主要表达与细胞核内。Western blot检测在GA作用后,上皮细胞中Sirt6、HMGB1表达量明显增加,在1 μmol/L达到高峰值,两者呈现相关性。结论：1 μmol/L的18-β甘草次酸作用LPS诱导的原代人鼻黏膜上皮细胞后,能够促进Sirt6表达量的增加,并抑制细胞核中HMGB1向胞质及胞外的移位和释放,提示18-p甘草次酸在抑制人鼻黏膜上皮细胞的炎性反应中具有重要作用。
【关键词】：鼻息肉 沉默信号调节因子6 高迁移率族蛋白1 18-β甘草次酸 脂多糖
【学位授予单位】：中国人民解放军医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R765
【目录】：

• 英文缩略词表5-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 前言11-15
• 参考文献13-15
• 第一部分 沉默信号调节因子6在鼻息肉中的表达及意义15-27
• 一.材料15-16
• 1.研究对象15
• 2.标本处理15
• 3.实验仪器及设备15-16
• 4.主要试剂16
• 二.实验方法16-20
• 2.1 免疫组化17-18
• 2.2 Western blot18-20
• 2.3 统计分析20
• 三.结果20-22
• 1.正常鼻黏膜与慢性鼻窦炎伴鼻息肉的临床特点20
• 2.正常鼻炥膜组织和鼻息肉组织中Sirt6的表达及分布20-21
• 3.Western blot检测Sirt6蛋白的表达21-22
• 四.讨论22-25
• 参考文献25-27
• 第二部分 18β-甘草次酸对脂多糖诱导鼻黏膜炎症的影响27-43
• 一.材料27-28
• 1.标本27
• 2.实验仪器及设备27
• 3.主要试剂及配制27-28
• 二.实验方法28-31
• 1.人鼻黏膜上皮细胞原代培养28-29
• 2.台盼蓝试剂检测细胞活力29
• 3.配制GA29
• 4. GA作用LPS诱导原代人鼻炥膜上皮细胞29-30
• 5. MTT法检测细胞增殖30
• 6.免疫突光染色30
• 7. Western Blot30-31
• 8.统计分析31
• 三.结果31-37
• 1.人鼻黏膜上皮细胞原代培养及形态观察31-33
• 2.GA作用LPS诱导鼻壚膜上皮细胞48h后HMGB1的表达定位33-36
• 3.GA对LPS诱导鼻炥膜炎症后上皮细胞HMGB1蛋白表达水平的影响36-37
• 四.讨论37-40
• 参考文献40-43
• 文献综述43-49
• 参考文献46-49
• 个人简历49-51
• 致谢51

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 赵干业;韩丽敏;童坦君;;SIRT6功能与疾病研究进展[J];生理科学进展;2014年04期

，

本文编号：867142