tBHQ对2型糖尿病大鼠视网膜HO-1、VEGF表达及胰岛功能的作用研究

发布时间：2017-09-28 01:10

  本文关键词：tBHQ对2型糖尿病大鼠视网膜HO-1、VEGF表达及胰岛功能的作用研究

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【摘要】：目的糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)是糖尿病最常见和最严重的眼部微血管并发症,越来越多的研究表明,氧化应激在诱导糖尿病形成及DR发生、发展中发挥着极其重要的作用。核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid2-related factor 2,Nrf2)信号通路是目前为止发现的最为重要的内源性抗氧化应激通路,在氧化应激与炎症相关组织损伤中有着重要作用。本实验通过建立2型糖尿病模型,予以Ⅱ相酶诱导剂叔丁基对苯二酚(tert-butylhydroquinone,tBHQ)进行干预,观察tBHQ对2型糖尿病大鼠视网膜血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响及对胰岛功能的影响,旨在为DR的早期防治提供实验性理论依据。方法通过喂养高脂高糖饲料联合小剂量链脲佐菌素(Streptozocin,STZ)腹腔注射将40只清洁级雄性Sprague-Dawley大鼠诱导建立2型糖尿病模型。建模成功后随机分为糖尿病组(DM组)和tBHQ干预组(tBHQ组)。同期匹配的10只正常大鼠为对照组(NC组)。于tBHQ干预喂养4w、12w后检测3组大鼠血清胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)和高密度脂蛋白(HDL-C)及空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS),通过公式计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)及胰岛素敏感指数(ISI)。将视网膜组织切片进行苏木精-伊红染色,观察组织病理学形态变化。采用免疫组织化学染色,观察检测HO-1和VEGF在视网膜组织中的表达。应用实时荧光定量PCR检测技术,测定各组大鼠视网膜HO-1及VEGFm RNA相对表达量。结果(1)成功建立32只2型糖尿病大鼠模型,成模率80%。(2)DM组大鼠出现典型糖尿病症状,血糖明显增高,毛色枯黄脱落、失去光泽,精神萎靡,活动减少迟缓,且部分大鼠出现四肢红肿、溃疡形成,眼部观察到晶状体浑浊变白。tBHQ组较DM组毛发整齐而有光泽,精神状态较好,活动增加。(3)DM组大鼠较NC组大鼠血脂TG、TC、LDL-C均明显升高,HDL-C明显降低(均P0.05)。各组间大鼠FBG比较差异有统计学意义(χ_(4w)~2=10.631,P_(4w)=0.005;χ~2_(12w)=15.053,P_(12w)=0.001),且_(12w)时tBHQ组大鼠血糖明显低于DM组大鼠。与NC组相比,DM组大鼠FINS、HOMA-IR显著增加,ISI显著降低,差异有统计学意义(P0.05)。tBHQ组与DM组相比,FBG、FINS、HOMA-IR均有下降,ISI增加,但差异无统计学意义(P0.05)。(4)4w、12w NC组大鼠视网膜各层组织结构清楚,排列整齐。4w DM组大鼠视网膜各层组织排列基本整齐,细胞间质水肿,神经节细胞空泡样变性,内、外核层排列紊乱;12w DM组大鼠视网膜各层组织排列紊乱,细胞间质水肿,神经节细胞数量减少,空泡样变性,内、外核层部分融合。与同一时间DM组相比较,tBHQ组视网膜各层组织排列基本整齐,各层细胞水肿相对较轻。(5)免疫组织化学检测结果显示,各组间HO-1蛋白表达量比较,差异有统计学意义(F_(4w)=689.533,P_(4w)=0.000;F_(12w)=289.988,P_(12w)=0.000);VEGF蛋白表达量比较,差异有统计学意义(F_(4w)=1084.956,P_(4w)=0.000;F_(12w)=1107.533,P_(12w)=0.000)。(6)荧光定量PCR结果显示视网膜中HO-1m RNA相对表达量,DM组及tBHQ组均较正常组增加,差异有统计学意义(P0.05)。tBHQ组较DM组增加,差异有统计学意义(P0.05)。视网膜中VEGFm RNA相对表达量,DM组及tBHQ组较NC组均增加,差异有统计学意义(P0.05)。tBHQ组较DM组降低,差异具有统计学意义(P0.05)。结论(1)采用高脂高糖饲料喂养联合小剂量STZ注射可成功建立大鼠DM、DR模型,造模成功大鼠出现糖脂代谢紊乱,胰岛素抵抗,视网膜组织可见早期DR典型改变;(2)糖尿病状态下,大鼠视网膜发生氧化应激及慢性炎症反应,HO-1、VEGF表达增多;(3)tBHQ可一定程度减轻DM大鼠胰岛素抵抗和增加胰岛素敏感性,降低血糖,减轻视网膜组织病理学改变;(4)tBHQ对糖尿病大鼠胰岛功能及视网膜组织的保护可能是通过诱导激活HO-1的表达,发挥抗氧化、抗炎性损伤等作用,一定程度下调VEGF的表达,保护糖尿病大鼠视网膜组织。
【关键词】：糖尿病性视网膜病变 叔丁基对苯二酚 血红素加氧酶-1 血管内皮生长因子 胰岛功能 核转录因子E2相关因子2
【学位授予单位】：西南医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R587.2;R774.1
【目录】：

• 摘要4-7
• Abstract7-10
• 前言10-14
• 材料与方法14-24
• 结果24-36
• 讨论36-43
• 结论43-44
• 参考文献44-49
• 英汉缩略词对照表49-50
• 致谢50-51
• 综述51-69
• 参考文献61-69
• 攻读硕士学位期间的研究成果69-70

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本文编号：932941