国产丙型肝炎抗体检测试剂盒检测灰区的设置及其处置方案的研究

发布时间：2017-10-11 00:10

  本文关键词：国产丙型肝炎抗体检测试剂盒检测灰区的设置及其处置方案的研究

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【摘要】：目的:设置目前在上海地区临床实验室常用的四种国产抗-HCV检测试剂盒检测的灰区范围,并获得各方法检测结果灰区样本的处置方案。方法:(1)分别用荣盛、新波、科华和科美四家国产抗-HCV检测试剂检测不同浓度的标准品,评价各国产试剂盒的线性关系及不精密度;(2)收集抗-HCV临床初检阳性样本656例,分别用荣盛、新波、科华和科美四家国产抗-HCV复检,分别计算不同初检范围的复检率;(3)选择抗-HCV初复检结果不一致的弱阳性样本338例,用RIBA确认试验和荧光定量PCR检测HCV RNA作为确认,以RIBA和HCV RNA确认为“金标准”,绘制ROC曲线,探讨其最佳临界值,即约登指数最大时的四家国产检测试剂的最佳临界测量值/阳性判断值(S/CO值);(4)以95%的真阳性和真阴性的S/CO值,分析四家国产抗-HCV检测试剂S/CO值阴、阳性灰区范围;(5)分析36份四家国产试剂复检抗-HCV结果不一致且在灰区范围内,RIBA或HCV RNA确认为阳性的样本,分析假阴性率;(6)分析四种不同国产试剂在不同抗-HCV浓度下(S/CO1和S/CO≥1=HCV RNA的检出率及检测值;(7)四种国产抗HCV检测试剂在不同抗-HCV浓度水平与HCV RNA基因型的关系;(8)发现12例特殊处于“窗口期”样本,分析抗体检测结果、RIBA确认与HCV RNA的关系,以及基因分型。结果:(1)标准品浓度在0.5NCU/ml,四家国产检测系统的批内不精密度分别从20.2%~36.2%;总不精密度分别从18.9%~34.8%。新波和科美线性关系斜率非常接近,分别为2.495和2.510;科华相对较低为1.348;荣盛最低为0.634。(2)四家国产抗-hcv检测试剂的阴性复检率均在90%以上,s/co值12.01,四家国产抗-hcv检测试剂阳性复检率均在95%以上(3)荣盛检测抗-hcv的最佳临界s/co值为1.31,敏感性为94.8%,特异性为94.6%,约登指数为0.894,roc曲线下面积为0.989;新波检测抗-hcv的最佳临界s/co值为2.48,敏感性为97.7%,特异性为94.6%,约登指数为0.923,roc曲线下面积为0.989;科华检测抗-hcv的最佳临界s/co值为3.22,敏感性为97.2%,特异性为97.3%,约登指数为0.945,roc曲线下面积为0.992;科美检测抗-hcv的最佳s/co值为4.32,敏感性为96.2%,特异性为94.6%,约登指数为0.908,roc曲线下面积为0.991。(4)四家试剂均阳性的样本,riba和hcvrna的阳性率高达96.3%(157/163);而四家试剂结果不一致的riba和hcvrna的阳性率39.2%(31/79),四家试剂均阴性的样本,riba和hcvrna的阳性率为26.0%(25/96);(5)36份样本中,单个试剂假阴性率为27.8%~94.4%之间,两两试剂组合后,假阴性率为8.3%~61.1%之间;(6)四家国产检测结果的s/co1的样本hcvrna的检出率显著低于s/co≥1样本的检出率;抗-hcvs/co1的样本的hcvrna的检测中位值分别为3.62、3.22、3.31、3.22,s/co≥1的中位值为6.67、6.65、6.65、6.65(p0.05)。另外,在抗-hcvs/co≥1的每家国产试剂的抗-hcv浓度中位数分别为:15.5、49.6、15.8、121.4;而hcvrna中位数值均在6.65左右。(7)113例得到丙肝基因型结果,其基因型为1a7(6.2%)、1b72(63.7%)、2a11(9.7%)、3a7(6.2%)、3b11(9.7%)、6a5(4.4%);在s/co1和s/co≥1的不同浓度下基因型分布没有显著性差异;(8)12例特殊样本抗体检测结果为,四家国产检测结果均为阴性或者部分厂家处于阴性或阳性灰区范围,RIBA确认结果为阴性或不确定,而HCV RNA病毒载量为弱阳性。12例样本的RNA基因分型,有8例均为1b型,提示早期感染的基因分型可能以1b为主。结论:(1)确认了四种常用国产抗-HCV抗体检测试剂的最佳临界S/CO值,并为临床提供了四种抗-HCV抗体检测试剂的灰区范围(复检范围);(2)四种抗-HCV抗体检测试剂灰区结果的解决方案,建议科华、新波、科美可作为荣盛的复检试剂;科华和科美可作为新波的复检试剂;科华和科美两者可互为对方的复检试剂。必要时,可引入双抗原夹心的检测方法作为复检的补充;(3)尝试分析了灰区样本产生的原因包括分析了说明了在初筛检测抗-HCV的不同方法(ELISA、TRFIA、CLIA),样本的S/CO值的大小不能代表HCV RNA含量的多少;HCV基因型与HCV浓度水平无显著相关性,在临床诊断中无任何提示意义;在进行血清HCV抗体检测的同时,可以增加HCV RNA试剂进行补充试验,以减少窗口期样本的漏检。
【关键词】：丙型肝炎病毒抗体检测 临界值 Cutoff值 灰区范围 ROC曲线 处置方案
【学位授予单位】：上海交通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R446.6;R512.63
【目录】：

• 摘要5-8
• ABSTRACT8-12
• 中英文对照12-15
• 前言15-20
• 第一部分：不同国产丙肝检测试剂的最佳临界值确认及灰区范围确定20-55
• 1.1 材料与方法21-39
• 1.1.1 材料21-24
• 1.1.2 方法24-39
• 1.2 结果39-51
• 1.2.1 精密度评价实验39-41
• 1.2.2 656例样本用四种国产检测试剂复检抗-HCV的结果41
• 1.2.3 HCV确认结果41-43
• 1.2.4 ROC曲线分析结果43-47
• 1.2.5 抗-HCV初检阳性标本用四家国产HCV试剂复检及RIBA和HCVRNA检测结果47-48
• 1.2.6 不同国产试剂抗-HCV S/CO值与RIBA&HCV RNA确证阳性结果的相关性48-49
• 1.2.7 不同国产试剂抗-HCV S/CO值与RIBA&HCV RNA确证阴性结果的相关性49-51
• 1.3 讨论51-54
• 1.4 结论54-55
• 第二部分 灰区样本的处置方案和产生原因分析及临床提示55-72
• 2.1 材料与方法55-58
• 2.1.1 材料55-57
• 2.1.1.1 研究对象55-56
• 2.1.1.2 仪器与试剂56-57
• 2.1.2 方法57-58
• 2.2 结果58-67
• 2.2.1 不同抗-HCV检测试剂盒的结果比较分析58-61
• 2.2.2 不同试剂组合后假阴性率比较61-62
• 2.2.3 36份RIBA阳性样本的4个抗原区分布情况62-63
• 2.2.4 样本抗-HCV检测结果描述63
• 2.2.5 HCV RNA检测结果分析63-64
• 2.2.6 HCV RNA分型检测结果64-66
• 2.2.7 窗口期样本的分析66-67
• 2.3 讨论67-71
• 2.4 结论71-72
• 结论72-73
• 参考文献73-79
• 致谢79-80

【参考文献】

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本文编号：1009376