HBV相关性肝癌中HBV cccDNA突变位点的研究

发布时间：2017-10-12 00:39

  本文关键词：HBV相关性肝癌中HBV cccDNA突变位点的研究

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【摘要】：目的:研究乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染导致的肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)患者共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA)的表达水平及各区间位点的变异,探讨HBV ccc DNA不同区域核苷酸位点突变与HCC疾病的关系。基于基因表达谱数据筛选HBV感染的HCC疾病关键基因因子,为基因靶向性预防和治疗肝癌提供参考因子。方法:收集49例重庆医科大学附属第一和第二医院HBV感染形成的HCC患者的血清及肝脏癌组织和配对的癌旁组织,首先检测患者临床病毒学指标,再用特异性荧光定量Tag Man探针方法检测肝组织内HBV ccc DNA和DNA在HCC癌组织及癌旁组织中的表达水平;然后利用滚环扩增(Roling circle amplification,RCA)技术特异性扩增癌组织及癌旁组织中肝脏内的cccDNA。进一步分析患者癌组织和癌旁组织HBV cccDNA和DNA表达水平的差异及ccc DNA在X区和前C/C区核苷酸突变位点及突变组合与HCC发生的关系;下载Gene Expression Ominibus(GEO)数据库中5对HBV感染的HCC配对样本基因表达谱数据,通过生物信息学分析方法筛选与HCC直接关联的关键候选因子。结果:(1)在49对hcc病人中,共有35例配对的癌组织和癌旁组织的cccdna有效检测,cccdna在癌组织中总体表达水平显著低于对应的癌组织(5.20vs.9.35copiesy/cell,p=0.0033);配对的癌组织和癌旁组织的cccdna经过rca扩增后,在x和prec/c区分别有18对和16对能有效扩增,cccdnax区域位点突变率在癌组织中显著高于癌旁组织(28.63%和20.94%,p=0.0313);序列比对后发现x区t1721g位点和prec/c区域a1979g的突变在hcc癌组织中发生的个数显著地高于癌旁组织(p=0.04075,or=10.1598;p=0.0155,or=13.7529);由t1727g突变形成的组合突变a1703g/t1727g、a1762t/g1764a/t1727g、a1703g/t1727g/a1762t/g1764a,a1979g突变形成的组合突变a1979g/a2189、a1979g/a2189c/t/c2288a、a1979g/a2189c/t/c2288a/a2075t在癌组织中发生的次数高于癌旁组织。(2)筛选得到的高风险肝癌模块中(75%)过量表达基因egr1,fos,dusp1,且共同参与mapk信号通路和下游通路细胞周期调控。结论:既往文献报道的hcc中的典型突变位点a1762t/g1764a、g1896a/g1899a等在本研究的样本中cccdna的x区间和prec/c区间在癌组织和癌旁组织中均有突变,且无明显差别;发现的t1721g和a1979g单核苷酸突变及组合位点突变更具有特征性,它们的突变可能与hbv感染的hcc疾病的发展关联密切。筛选得到的egr1,fos,dusp1基因很可能成为早期识别hcc的生物标志,同时也为基因靶向性治疗HCC提供了候选因子。
【关键词】：乙型肝炎病毒 共价闭合环状DNA 核苷酸突变 候选因子 靶向治疗
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R512.62;R735.7
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照4-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-14
• 第一部分 HBV相关的肝癌中HBV cccDNA核苷酸突变研究14-39
• 1 材料与仪器14-15
• 2.方法15-18
• 3.结果18-29
• 4 讨论29-34
• 小结34-35
• 参考文献35-39
• 第二部分 HBV相关性肝癌关键基因因子的筛选39-51
• 1 材料39
• 2.方法39-42
• 3.结果42-47
• 4 讨论47-48
• 小结48-49
• 参考文献49-51
• 文献综述51-55
• 参考文献53-55
• 致谢55-56
• 攻读学位期间撰写和发表的论文56

【参考文献】

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1 Xin Zhang;Hui-Guo Ding;;Key role of hepatitis B virus mutation in chronic hepatitis B development to hepatocellular carcinoma[J];World Journal of Hepatology;2015年09期

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本文编号：1015723