基于超高效液相色谱—质谱联用的不同HBV DNA载量的慢性乙型肝炎代谢组学分析

发布时间：2017-10-18 11:28

  本文关键词：基于超高效液相色谱—质谱联用的不同HBV DNA载量的慢性乙型肝炎代谢组学分析

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【摘要】：目的:应用超高效液相色谱-质谱联用平台,研究不同HBV DNA载量的慢性乙型肝炎患者的小分子代谢化合物的差异,为慢性乙型肝炎的临床诊断、疗效监测、预后评估和长期随访提供新的血清学指标,进一步探索这些差异与乙型肝炎发病机制的关系。材料和方法:所有研究对象均满足2015年中华医学会感染病学和中华医学会肝病学分会制定的《慢性乙型肝炎防治指南》中该病的诊断标准,并满足本研究的其它纳入标准和排除标准。利用超高效液相色谱-质谱联用系统平台的技术,在正、负离子模式下检测慢性乙型肝炎人群中HBV DNA阳性组(25例)和HBV DNA阴性组(10例)两组血清的代谢化合物。质谱采集的原始数据通过SIEVE V2.1软件进行滤噪、重叠峰解析、峰对齐、峰匹配、标准化和归一化等处理。分别输出正、负离子峰表,保存为Excel表,采用80%规则,处理缺失值。将处理缺失值后的Excel数据导入SIMCA—P 13.0软件中,采用偏最小二乘法—判别分析方法进行模式识别分析。观察模型中样本的分布情况及其可靠性和预测能力,计算偏最小二乘法模型中各变量的变量投射重要性值,同时结合得分图、载荷图和非参数检验,筛选出潜在的生物标志物。再根据质荷比和保留时间查找数据库等进行比对和筛选,确认该物质。用SPSS19.0软件进行统计分析。结果:经过两独立样本t检验,结果表明HBV DNA阳性组和HBV DNA阴性组的年龄分布没有统计学差异,P=0.942(39.64±11.09,43.60±11.49)。经过Fisher,s Exact Test,P=0.258,我们可以认为两组的性别构成比没有差异。进一步比较2组患者的肝脏功能情况,结果显示,在谷丙转氨酶、谷草转氨酶和γ-谷氨酰基转移酶水平上,HBV DNA阳性组的值显著高于HBV DNA阴性组(P=0.010,P=0.003和P=0.009);然而,在白蛋白、球蛋白、总胆红素、碱性磷酸酶和胆碱酯酶的水平方面,两组患者的值是相似的。通过超高效液相色谱-质谱联用技术初步鉴定出336种小分子代谢化合物,其中在负离子模式下鉴定出151个代谢化合物,在正离子模式下鉴定出185个代谢化合物,最后只筛选出2种有差异的代谢化合物。本研究成功构建了HBV DNA阳性组和HBV DNA阴性组偏最小二乘法代谢谱图分析模型((R2=0.00,0.666),Q2=(0.00,-0.201)),在负离子模式条件下,筛选出了1种有差异的代谢化合物是异柠檬酸,该物质在HBV DNA阴性组中的含量明显高于HBV DNA阳性组的患者(P=0.019);在正离子模式条件下,筛选出了溶血磷脂酰乙醇胺(22:4),该物质在HBV DNA阳性组中的含量明显高于HBV DNA阴性组的患者,差异有统计学意义(P=0.032)。结论:1.基于超高效液相色谱-质谱联用技术和偏最小二乘法一判别分析模型,可能为评估慢性乙型肝炎患者不同HBV DNA载量提供了一种的新方法。2.利用代谢组学的技术筛选出的差异性代谢物:异柠檬酸和溶血磷脂酰乙醇胺(22:4)可以作为区分HBV DNA阳性组和阴性组的潜在生物标志物,并表明机体不同的病理生理状态。3.三羧酸循环通路和磷脂代谢通路可能为乙肝的发病机制提供新的研究角度和视野。
【关键词】：乙型肝炎 HBV DNA 代谢组学 超高效液相色谱-质谱联用 偏最小二乘法-判别分析
【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R512.62
【目录】：

• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 前言11-13
• 材料和方法13-15
• 1. 研究对象13
• 2. 仪器和试剂13-14
• 2.1 乙肝相关指标的检测仪器和试剂13-14
• 2.2 代谢组学技术的检测仪器和试剂14
• 3.样本的采集和处理14
• 3.1 样本采集14
• 3.2 样品预处理14
• 4.分析条件14-15
• 4.1 色谱条件14
• 4.2 洗脱梯度14
• 4.3 质谱条件14-15
• 5. 数据处理15
• 6. 统计分析15
• 结果15-21
• 1. 实验组和对照组基本情况的比较15-16
• 2. 乙型肝炎患者血清代谢组学分析16-17
• 3. 代谢轮廓对各研究对象的区别及模式识别分析17-20
• 4. 有差异代谢化合物的筛选和发现20-21
• 讨论21-24
• 结论24-25
• 参考文献25-30
• 综述30-54
• 参考文献47-54
• 攻读学位期间发表文章情况54-55
• 致谢55-56

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本文编号：1054661