NAFLD小鼠Th17通路变化及白藜芦醇作用机制的初步探讨

发布时间：2017-10-20 08:30

  本文关键词：NAFLD小鼠Th17通路变化及白藜芦醇作用机制的初步探讨

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【摘要】：目的:1建立非酒精性脂肪性肝病的动物模型。2初步探讨Th17通路在非酒精性脂肪性肝病中的作用及白藜芦醇对其作用机制的初步研究。方法:本实验采取随机-对照的研究方法。将SPF级雄性C57BL/6小鼠按照随机数字表进行随机分组。(1)60只雄性C57BL/6小鼠,6-8周龄,自由摄食AIN93对照饲料7天后,随机分为Control组、高脂饮食(High fat diet,HFD)组及西方饮食(Western diet,WD)组,Control组16只,HFD组及WD组分别22只。分别给予对照饲料、高脂饲料、高脂饲料加高糖饮用水(42g/L),造模时间33周。从WD组中随机抽取12只小鼠,每组6只,分别给予白藜芦醇(resveratrol,Res)及羧甲基纤维素(carboxymethylcellulose sodium,CMC)45mg/kg/day灌胃,继续喂养6周后处死小鼠。(2)定期观察小鼠的进食、精神状态及毛发光泽度等,每周测量小鼠体重并记录。(3)观察各组小鼠肝脏外形变化,记录肝重,计算并比较肝重指数。(4)应用苦味酸-天狼猩红及苏木素-伊红(hematoxylin and eosin,HE)染色观察肝组织病理学的改变。(5)检测血清白细胞介素-17(interleukin-17,IL-17)、甘油三酯(Triglyceride,TG)、天冬氨酸氨基转移酶(Aspartate aminotransferase,AST)及丙氨酸氨基转移酶(Alanine aminotransferase,ALT)的变化情况。(6)应用实时荧光定量PCR(Real-time fluorescent quantitation PCR,Real-time q PCR)方法检测肝组织中TGF-βm RNA、IL-22 m RNA、RORγt m RNA及IL-17A m RNA的表达情况。(7)提取肝、脾组织中的淋巴细胞,行流式细胞学检测,了解肝、脾组织中CD4/CD8比值及CD4+T细胞IL-17、RORγt的表达情况。(8)应用免疫组织化学的方法检测肝脏组织中α-SMA的表达情况。结果:(1)HE及苦味酸-天狼猩红染色显示,Control组肝脏肝细胞大小及排列正常;HFD组和WD组形成非酒精性脂肪性肝炎及肝纤维化,造模成功;与WD+CMC组比较,WD+Res组肝纤维化程度明显减轻(P0.05)。(2)与Control组比较,HFD组和WD组血清ALT、AST及TG明显升高,差异有统计学意义(P0.05);与HFD组比较,WD组ALT、AST升高,差异有统计学意义(P0.05),TG降低,差异有统计学意义(P0.05);与WD+CMC组比较,WD+Res组血清ALT、AST及TG均明显降低,差异有统计学意义(P0.05)。(3)Real-time QPCR:与Control组比较,WD和HFD组TGF-β、IL-22及RORγt m RNA表达增高,差异有统计学意义(P0.05),HFD组IL-17 m RNA表达无明显差异(P0.05);与HFD组比较,WD组TGF-β、IL-22、RORγt及IL-17 m RNA表达增高,差异有统计学意义(P0.05);与WD+CMC组比较,WD+Res组TGF-β、IL-22、RORγt及IL-17 m RNA表达均明显降低,差异有统计学意义(P0.05)。(4)血清IL-17:与Control组比较,HFD组及WD组明显升高,差异有统计学意义(P0.05);WD组较HFD组升高,差异有统计学意义(P0.05);与WD+CMC组比较,WD+Res组IL-17表达量明显降低,差异有统计学意义(P0.05)。(5)流式细胞学结果:肝脏:与Control组及HFD组比较,WD组CD4/CD8比值升高,差异有统计学意义(P0.05),Control组与HFD组比较CD4/CD8比值无明显差异(P0.05);与Control组比较,HFD组及WD组CD4+T RORγt表达量升高,差异有统计学意义(P0.05),且WD组较HFD组升高,差异有统计学意义(P0.05)。与WD+CMC组比较,WD+Res组CD4/CD8比值及CD4+T RORγt表达量明显下降,差异有统计学意义(P0.05);CD4+T IL-17的表达量在治疗前后各组间均无明显表达。脾脏:CD4/CD8比值、CD4+T RORγt及CD4+T IL-17表达量在治疗前后均无明显变化。(6)免疫组化:α-SMA:与Control组比较,HFD组及WD组α-SMA表达量增高(P0.05),且WD组明显高于HFD组(P0.05);同WD+CMC组比较,WD+Res组表达下降,差异有统计学意义(P0.05)。结论:1通过采用经典的西方饮食,成功建立了NASH相关肝纤维化小鼠模型。2模型组血清及组织中IL-17表达升高,提示Th17通路在NAFLD进展中发挥了重要作用。3果糖在NASH相关肝纤维化的形成中发挥着关键作用。4α-SMA、TGF-β、IL-22、IL-17及RORγt在NAFLD炎症反应及肝纤维化中均发挥了重要作用。5肝脏CD4/CD8比值的变化在NASH相关肝纤维化中发挥了重要的作用。6 Res可能通过下调肝脏CD4/CD8比值发挥抗纤维化作用。7 Res可能通过下调肝淋巴细胞内CD4+T RORγt及组织中的RORγt表达在NAFLD中发挥治疗作用。8 Res可能通过抑制α-SMA、TGF-β、IL-22及IL-17表达在NAFLD中发挥治疗作用。
【关键词】：非酒精性脂肪性肝病 肝纤维化 IL-17 白藜芦醇 果糖
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R575
【目录】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 英文缩写10-11
• 前言11-13
• 材料与方法13-26
• 结果26-30
• 附图30-48
• 附表48-50
• 讨论50-55
• 结论55-56
• 参考文献56-61
• 综述 肝纤维化相关免疫学机制研究进展61-77
• 参考文献69-77
• 致谢77-78
• 个人简历78

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 陆伦根;;肝纤维化临床研究的现状和展望[J];药品评价;2007年04期

2 王丽春,赵连三;肝纤维化的实验动物模型[J];中国实验动物学报;2004年04期

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本文编号：1066267