Hic-5基因与大鼠胆管纤维化关系的研究

发布时间：2017-10-21 09:11

  本文关键词：Hic-5基因与大鼠胆管纤维化关系的研究

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【摘要】：目的:胆管纤维化作为一种胆管损伤修复的必经阶段,纤维化的轻重程度直接决定了修复后的胆管组织功能的恢复情况。致纤维化的各种因子的表达及其互相间的调控关系对组织纤维化的发生发展起着至关重要的作用。本实验主要通过对3个不同分组(对大鼠胆管进行钳夹制作胆管纤维化模型手术组、仅进行大鼠腹部切开探查胆管,再缝合,不进行胆管钳夹的假手术组、正常饲喂不进行任何处理的正常组)大鼠模型的研究,收集3个组中大鼠的胆管组织标本进行HE和Masson染色,光镜下观察胆管组织的纤维化情况;进行PCR检测3个组中胆管组织的Hic-5、TGF-β1的m RNA表达高低情况;免疫组织化学及Western-blot检测3个组中胆管组织标本中Hic-5、TGF-β1的表达量的高低;通过以上方法来探究Hic-5基因在大鼠胆管纤维化中的作用机制。方法:1、选取4-6周龄SD级雌性大鼠30只,随机分为3组:对大鼠胆管进行钳夹90min制作胆管纤维化模型的手术组;仅进行大鼠腹部切开后探查胆管再缝合,不进行胆管钳夹的假手术组;正常饲喂不进行任何处理的正常组。造模后予以同样的饲喂方法,继续饲养21d,处死后分别摘取3个不同分组的大鼠胆管组织。2、将摘取的大鼠胆管组织进行HE和Masson染色病理检测,染色后的组织置于光镜下,观察3个组的大鼠胆管组织中纤维化的变化情况。3、PCR检测不同组的大鼠胆管组织中Hic-5、TGF-β1的m RNA表达水平。4、免疫组织化学法及Western blot法检测大鼠胆管组织Hic-5、TGF-βl的蛋白表达情况。结果:(1)行为学上的观察结果显示:正常组的大鼠精力充沛,活动灵敏,皮毛光滑,饮食正常。假手术组大鼠的行为学表现除活动度稍差,进食量相对较少,余无明显的异常。手术组大鼠灵敏度相对较低,警惕性较差,精神不佳,皮毛干燥发黄,进食量和饮水量均较正常组和假手术组低。(2)HE染色结果:正常组大鼠胆管的胆管上皮细胞排列整齐,形态完整,无纤维条梭状结构和炎症细胞的浸润;镜下观,假手术组的大鼠胆管上皮细胞排列整齐,形态正常,可见极少量的纤维条梭状结构;胆管钳夹组镜下发现胆管上皮细胞排列紊乱,形态不规则,可见大量的纤维条梭状结构。(3)Masson染色结果:正常组和假手术组大鼠胆管未见明显的蓝色条梭状染色结构,而手术组的胆管上可见明显的蓝色的条梭状结果即为纤维条梭组织。(4)PCR分析各组间Hic-5、TGF-β1表达结果:胆管钳夹手术组的Hic-5、TGF-β1的m RNA表达明显呈现出高表达状态,Hic-5、TGF-β1的m RNA表达水平:正常组和假手术组的表达均较低,手术组与正常组和假手术组比较,表达明显增高(P0.05),正常组和假手术组比较,差异没有统计学意义(P0.05)。(5)免疫组织化学显示:在大鼠胆管钳夹的手术组中可见大量的Hic-5、TGF-β1的蛋白表达,大量的阳性染色颗粒分布区域主要集中在胆管周围,均多于正常组和假手术组,而正常组和假手术组的阳性表达均较少。将手术组的Hic-5和TGF-β1阳性表达面积进行统计学分析,结果显示两组具有相关性。(6)Western blot分析结果显示,胆管钳夹的手术组Hic-5、TGF-β1的蛋白表达明显呈现高表达,而正常组和假手术组的蛋白表达水平均偏低,手术组与正常组和假手术组比较,Hic-5、TGF-β1的蛋白表达明显增高,差异具有统计学意义(P0.05),假手术组和正常组的Hic-5、TGF-β1蛋白表达相比较,差异没有统计学意义(P0.05)。结论:1、Hic-5和TGF-β1在手术组的胆管组织中表达较正常组和假手术组明显增高,说明两者均可能参与了胆管纤维化的发生发展过程;2、在手术组纤维化的大鼠胆管组织中,Hic-5和TGF-β1的表达及变化,经过统计学分析结果提示两组存在着相关性,表明两者可能存在着相互调控的关系。
【关键词】：胆管纤维化 Hic-5 TGF-β1
【学位授予单位】：西南医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R575.7
【目录】：

• 中文摘要3-5
• 英文摘要5-9
• 前言9-11
• 材料和方法11-23
• 结果23-34
• 讨论34-41
• 结论41-42
• 参考文献42-47
• 英汉专业术语及缩略词对照47-48
• 致谢48
• 综述48-61
• 参考文献56-61

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