缺血预处理通过激活SOCS-1以及下调TRAF6的表达保护大鼠小肠缺血再灌注损伤

发布时间：2017-10-23 01:18

  本文关键词：缺血预处理通过激活SOCS-1以及下调TRAF6的表达保护大鼠小肠缺血再灌注损伤

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【摘要】：目的:为了探讨TLR4(Toll like receptor 4)-TRAF6(tumor necrosis factor receptor associated-factor 6)信号通路在小肠缺血和再灌注损伤中的表达,以及经过缺血预处理后大鼠小肠和远隔器官组织中TRAF6和SOCS-1(Suppressor of cytokine signaling-1)的表达变化及意义。我们检测了小肠缺血再灌注损伤后,各重要脏器相关凋亡基因的表达水平,并观察其与小肠损伤的关系。方法:将48只Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠(250-300g),随机分为假手术组、缺血组、缺血再灌注组和缺血预处理组(n=8)。假手术组(Sham)大鼠仅行肠系膜上动脉(superior mesenteric artery,SMA)的解剖,然后关腹2h;缺血组(I)分为缺血1h组(I1h)、缺血3h组(I3h)、缺血6h组(I6h),采用无创血管夹夹闭SMA造成小肠缺血模型;通过夹闭SMA1h后再灌注1h建立缺血再灌注组(IR);将大鼠缺血10分钟后再灌注10分钟,然后夹闭SMA 1h后再灌注1h建立缺血预处理组(IP)。对肠道损伤进行组织病理观察(HE染色),并检测下腔静脉血浆中髓过氧化物酶(Myeloperoxidase,MPO)的水平,采用TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法检测细胞凋亡,免疫组化检测TRAF6和SOCS-1在小肠组织中的表达,实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR)检测各组TLR4、TRAF6、rip1(receptorinteractingprotein1)、socs-1的表达。westernblot方法检测tlr4、traf6、rip1、socs-1、cleaved-caspase-3(cleavedcysteinylaspartatespecificproteinase-3)的表达。对traf6与rip1、socs-1在mrna水平上进行相关性分析。结果:(1)与假手术组比较,各实验组中下腔静脉血浆mpo水平增高(p0.05),缺血再灌注组达到高峰,缺血预处理后,mpo水平明显下降(p0.05);(2)he染色显示缺血组与再灌注组中,小肠黏膜损伤严重,缺血预处理后,小肠黏膜损伤减轻,tunel染色法检测出缺血组与再灌注组中,细胞凋亡比例升高(p0.05),缺血预处理后,细胞凋亡比例下降;(3)在缺血组和再灌注组,小肠组织中tlr4、traf6、rip1、cleaved-caspase-3表达升高,socs-1表达降低,其中,在缺血3h、6h和再灌注组,与假手术组的差异有统计学意义(p0.05)。缺血预处理后,与再灌注组比较,小肠中tlr4、traf6、rip1、cleaved-caspase-3表达明显降低(p0.05),socs-1表达明显升高(p0.05),且相关分析显示traf6mrna的升高与rip1mrna的上调呈正相关(r=0.84433406),与socs-1mrna的下调呈负相关(r=-0.76229915);(4)免疫组化显示小肠在缺血组和再灌注组traf6表达增强,socs-1表达减弱,在缺血预处理组,traf6表达减弱,socs-1表达增强,且阳性部位主要是小肠黏膜细胞;(5)在各组中大鼠肺、肝、肾组织的tlr4、traf6、rip1、socs-1、cleaved-caspase-3的表达与小肠组织具有相似的变化趋势。结论:(1)小肠缺血与再灌注损伤过程中tlr4-traf6信号通路和socs-1参与细胞凋亡;(2)小肠缺血预处理后,可能通过激活SOCS-1,抑制TLR4-TRAF6信号通路,从而起抗细胞凋亡作用。
【关键词】：小肠缺血再灌注损伤 缺血预处理 TRAF6 SOCS-1 细胞凋亡
【学位授予单位】：西南医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R574
【目录】：

• 中文摘要3-6
• 英文摘要6-10
• 前言10-14
• 材料与方法14-32
• 结果32-47
• 讨论47-52
• 结论52-53
• 参考文献53-61
• 英汉缩略词对照表61-63
• 致谢63-65
• TOLL样受体4与小肠缺血的研究进展(综述)65-79
• 参考文献73-79
• 本人攻读研究生期间所发表论文79-81

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本文编号：1080955