三肽基乙醛对大鼠急性胰腺炎的保护作用及其机制的研究

发布时间：2017-10-23 03:18

  本文关键词：三肽基乙醛对大鼠急性胰腺炎的保护作用及其机制的研究

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【摘要】：目的:本实验通过经十二指肠乳头逆行胰胆管注射3.5%牛磺胆酸钠溶液法制作SD大鼠急性胰腺炎模型,研究蛋白酶体抑制剂三肽基乙醛(Z-Leu-Leu-Leu-C HO,MG-132)对大鼠急性胰腺炎的保护作用,并探讨其作用机制。方法:1模型制备:随机选取清洁级健康雄性SD大鼠30只,体重150±20g,将以上大鼠随机分为对照组(control group,C组)(n=10),急性胰腺炎组(acute pancreatitis group,A组)(n=10)和MG-132治疗组(MG-132 treatment group,T组)(n=10)。采用经十二指肠乳头逆行胰胆管注入3.5%牛磺胆酸钠溶液(1ml/kg,0.2 m L/min)的方法制作急性胰腺炎模型。对照组采用相同手术方式,但不注入牛磺胆酸钠溶液,仅轻轻翻动胰腺和十二指肠。MG-132治疗组于制模前30min腹腔注射MG-132(10mg/kg溶于0.25ml二甲基亚砜(DMSO)),余操作同急性胰腺炎组。急性胰腺炎组及对照组于相同时间点腹腔注射0.25ml DMSO。术后各组大鼠禁食不禁饮。各组分别于术后6h心腔穿刺取血2ml,3000r/min离心15min后-80℃冰箱冻存,同时迅速切取胰腺组织,立即用10%福尔马林溶液固定,备检。2应用比色法检测血淀粉酶(amylase,AMS)水平。3应用ELISA法检测血白介素-6(IL-6)水平。4应用Westen-blot法检测胰腺组织中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和巨噬细胞炎性蛋白-2(MIP-2)的表达。5应用HE染色法观察大鼠胰腺病理变化,参照Schmidt's方法对大鼠胰腺行病理评分。6应用免疫组化法分析核因子-κB(NF-κB)的表达情况,并进行免疫组化评分。7实验数据采用spss18.0软件进行处理,血淀粉酶、血IL-6值、MCP-1及MIP-2多组数据比较采用方差分析SNK法,免疫组化评分与病理评分采用Kruskal-Wallis H检验,P0.05表示差异具有统计学意义。结果:1血清淀粉酶水平:对照组血清淀粉酶水平为158.04±0.91U/L,急性胰腺炎组血清淀粉酶水平为634.38±3.07U/L,MG-132治疗组为396.03±1.74U/L。急性胰腺炎组及MG-132治疗组血清淀粉酶水平较对照组均有明显升高(P0.05);治疗组与急性胰腺炎组相比较,血淀粉酶水平有所降低,差异具有统计学意义(P0.05)。2血IL-6水平:对照组大鼠血IL-6水平为3.52±1.94U/L,急性胰腺炎组血IL-6水平为14.97±2.89U/L,MG-132治疗组为6.04±2.73U/L。急性胰腺炎组与MG-132治疗组血IL-6水平较对照组均有明显升高(P0.05);治疗组与急性胰腺炎组相比,血IL-6水平有所降低(P0.05)。3 MCP-1及MIP-2的表达水平:对照组大鼠胰腺组织中MCP-1及MIP-2表达水平分别为0.23±0.10U/L,0.27±0.08U/L;急性胰腺炎组分别为0.59±0.10U/L,0.56±0.12U/L;MG-132治疗组分别为0.38±0.07U/L,0.43±0.10U/L。急性胰腺炎组与MG-132治疗组较对照组胰腺组织中MCP-1及MIP-2表达水平均有明显升高(P0.05);治疗组胰腺组织中MCP-1及MIP-2的表达水平水平与急性胰腺炎组的水平相比均有所降低(P0.05)。4大鼠胰腺大体标本观察:对照组大鼠胰腺组织未见充血、水肿及渗出;急性胰腺炎组大鼠胰腺组织可见明显充血、水肿,伴腹腔内淡黄色腹水;MG-132治疗组大鼠可见胰腺组织轻度充血、肿胀,腹腔内未见明显腹水。5大鼠胰腺组织病理学评分结果:对照组大鼠胰腺组织无出血水肿,无炎细胞浸润及坏死,评分为0分;急性胰腺炎组大鼠胰腺组织腺泡水肿,小叶间隙明显增宽,并伴有片状坏死,实质及间质内可见大量炎细胞浸润,评分为8.21±1.73;MG-132治疗组胰腺组织内可见炎细胞浸润较急性胰腺炎组减少,腺泡水肿减轻,炎症程度较急性胰腺炎组减轻,未见坏死灶,评分为4.63±0.86。与对照组相比,MG-132治疗组及急性胰腺炎组病理评分具有显著性差异(P0.05)。6免疫组化检测显示,对照组大鼠胰腺组织中NF-κB少量表达,评分为2.10±0.99,急性胰腺炎组胰腺组织中NF-κB大量表达,评分为7.70±2.95,MG-132治疗组胰腺组织中NF-κB表达较急性胰腺炎组有所减少,但与对照组相比,明显增多,评分为4.20±2.25。与对照组相比MG-132治疗组及急性胰腺炎组免疫组化评分具有显著性差异(P0.05)。结论:1急性胰腺炎时血IL-6增多,胰腺组织中NF-κB、MCP-1及MIP-2表达增多。这些因子表达增多在胰腺损伤中有着重要的作用。2本研究结果提示:蛋白酶体抑制剂MG-132对大鼠急性胰腺炎有保护作用;其机制可能是:通过抑制NF-κB活化从而控制炎症反应。
【关键词】：急性胰腺炎 MG-132 牛黄胆酸钠 NF-κB IκB
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R576
【目录】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 前言11-12
• 材料与方法12-21
• 结果21-23
• 附图23-30
• 附表30-33
• 讨论33-37
• 结论37
• 参考文献37-40
• 综述 核因子在急性胰腺炎中的作用40-47
• 参考文献45-47
• 致谢47-48
• 个人简历48

【参考文献】

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