S1P1受体调节剂对放射引起的小肠干细胞损伤及免疫炎症反应的调节作用研究

发布时间：2017-10-27 03:37

  本文关键词：S1P1受体调节剂对放射引起的小肠干细胞损伤及免疫炎症反应的调节作用研究

  更多相关文章： 小肠干细胞 谱系追踪 炎性细胞 放射损伤

【摘要】：小肠绒毛是机体内增殖最活跃的组织之一,小肠粘膜上皮细胞终身在不断地自我更新,这一过程依赖小肠隐窝中的干细胞的持续增殖、分化取代外层的终末分化细胞来完成。当照射剂量8Gy，隐窝细胞出现凋亡,照射剂量14Gy,隐窝细胞消失,绒毛出现脱落。因此胃肠的放射损伤及恢复程度与隐窝细胞或者干细胞的损伤、再生密切相关。小肠干细胞分子表面标志的研究进展缓慢,一直制约着对小肠干细胞调控及胃肠损伤机制的研究。直到近几年来,利用基因小鼠模型和谱系追踪技术,才成功的鉴定到了多种小肠干细胞的分子表面标志,确定了小肠干细胞的位置和分群。目前鉴定的小肠干细胞主要分为2类,一类为静息干细胞,主要位于小肠隐窝基底部+4位,表面标志包括Bmi1, mTert, Hopx及Lrig1等,另一类为Lgr5标记的循环干细胞。其中,lgr5循环干细胞对辐射敏感,而辐射耐受的静息干细胞可在激活后补充循环干细胞和快速增殖的TA细胞。前期我们的研究结果表明,S1P1受体调节剂对小肠隐窝细胞有明显的保护作用。S1P1是磷脂类分子S1P的的G蛋白偶联受体,主要分布在血管内皮细胞和淋巴细胞上。在维持血管通透性和完整性、淋巴细胞发育和循环上有重要的作用。因此本实验第一部分主要应用带有小肠干细胞特征标志的模式动物,如小鼠、小鼠等,研究Lgr5标记的连续分裂ISCs和Bmi1标记的静态ISCs放射损伤特点,研究S1P1受体调节剂对放射后小肠干细胞组织重建的调控作用。首先我们培育并鉴定、鼠,然后通过他莫西芬诱导并在诱导后5d观察到荧光细胞从隐窝开始向绒毛顶尖处移动,由此建立了小肠干细胞分析检测方法。其次通过不同照射剂量的摸索观察放射对小肠干细胞的影响,发现在10Gy腹部照射和12Gy全身照射下,可观察到小肠干细胞在照射后从消失到再生的过程。随后研究了S1P1受体调节剂对不同照射剂量下小肠干细胞组织重建的调控作用,发现S1P1受体调节剂CYM5442对16Gy高剂量局部照射小鼠没有明显的治疗作用；在15Gy全身照射后3.5d CYM5442并不能有效的增加Lgr5+细胞的数量,但能有效的促进隐窝细胞的增殖。我们通过分离不同肠道组织(十二指肠、空肠、回肠、结肠),发现10Gy和12Gy全身照射下S1P1受体激动剂CYM5442能在照射后3.5d和7d提高各个肠段组织再生隐窝的数量。应用qPCR的方法检测了15Gy照射后干细胞相关基因(Lgr5、olfm4、mTert、Hopx、Lrig1、Bmi1、Ascl2)的表达,发现S1P1受体调节剂CYM5442在照后6h显著提高这些基因的表达、照后1d对mTert、Bmil等+4位基因依然有着提高的作用,照后3.5d对干细胞相关基因则影响不大。小肠粘膜在辐射诱导的免疫炎性反应中是高敏感的器官。小肠在受到放射损伤后会产生大量的细胞因子。因此在第二部分实验中我们应用流式细胞分析等技术重点观察天然免疫细胞如中性粒细胞、单核—巨噬细胞等在照后不同时间的变化,分析炎症免疫细胞浸润与放射损伤发生、发展的关系,并研究S1P1受体调节剂对炎性反应的调控作用。我们通过分离小鼠小肠固有层细胞,发现在15Gy全身照射后24h和48h,SlP1受体调节剂CYM5442能显著减少中性粒细胞的数量,但对其它类型的细胞群体没有影响。随后用qPCR的方法检测了15Gy照射后炎性因子相关基因(白介素类IL-1b、IL-6、IL-10、IL-12b,趋化因子Ccl2、Ccl5, Cxcl1、Cxcl2、Cxcl10,粘附分子Icaml、Vcaml)的表达,发现S1P1受体调节剂CYM5442在照射后6h抑制白介素类和趋化因子,提高粘附分子的表达。照射后1d反而提高白介素类和趋化因子,抑制粘附分子。照射后3.5d则对这些基因影响不大。我们通过S1P1受体调节剂对小肠干细胞组织功能重建机制以及放射引起的肠道组织炎性反应的研究,可以更好的揭示急性放射病发病新机制,同时也为基于靶点的抗放药物设计提供了基础。
【关键词】：小肠干细胞 谱系追踪 炎性细胞 放射损伤
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R574.5
【目录】：

• 个人简历3-7
• 缩略语表7-8
• 摘要8-11
• ABSTRACT11-15
• 前言15-20
• 第一章 S1P1受体调节剂对放射后小肠干细胞组织重建的调控作用20-55
• 1 实验材料21-23
• 1.1 实验动物21-22
• 1.2 实验试剂22
• 1.3 仪器与耗材22-23
• 2 实验方法23-35
• 2.1 Lgr5~(tml(cre/ERT2))；Gt(ROSA)26Sor~(tml(Smo/EYFP))和Bmi1~(tml(cre/ERT));Gt(ROSA)26Sor~(tml(Smo/EYFP))小鼠基因型的鉴定23-24
• 2.2 利用Lgr5~(tml(cre/ERT2))；Gt(ROSA)26Sor~(tml(Smo/EYFP))小鼠建立小鼠小肠干细胞分析检测方法24-26
• 2.3 应用Lgr5、Bmi1干细胞分子标志小鼠观察放射对小肠干细胞损伤的影响26-28
• 2.4 S1P1受体调节剂对不同剂量照射的小鼠小肠干细胞的损伤及组织重建的影响28-31
• 2.5 S1P1受体调节剂对15Gy照射后小鼠小肠干细胞相关标志基因表达的影响31-35
• 3 实验结果35-53
• 3.1 Lgr5~(tml(cre/ERT2))；Gt(ROSA)26Sor~(tml(Smo/EYFP))和Bmil~(tml(cre/ERT))；Gt(ROSA)26Sor~(tml(Smo/EYFP))小鼠基因型的鉴定35-36
• 3.2 利用Lgr5~(tml(cre/ERT2))；Gt(ROSA)26Sor~(tml(Smo/EYFP))小鼠建立小鼠小肠干细胞分析检测方法36-40
• 3.3 应用Lgr5、Bmi1干细胞分子标志小鼠观察放射对小肠干细胞损伤的影响40-45
• 3.4 S1P1受体调节剂对不同剂量照射的小鼠小肠干细胞的损伤及组织重建的影响45-49
• 3.5 S1P1受体激动剂对15Gy全身照射后小肠干细胞相关标志基因表达的影响49-53
• 4 讨论53-55
• 第二章 S1P1受体调节剂对放射引起的炎性反应的调节作用55-86
• 1 实验材料56-57
• 1.1 实验动物56
• 1.2 实验试剂56-57
• 1.3 仪器与耗材57
• 2 实验方法57-70
• 2.1 利用流式细胞仪建立小肠固有层细胞分析检测方法57-63
• 2.2 15Gy全身照射对小鼠小肠固有层细胞的影响63
• 2.3 S1P1受体调节剂对15Gy全身照射小鼠照后不同时间点小肠固有层免疫炎性细胞浸润的影响63-66
• 2.4 S1P1受体调节剂CYM5442对15Gy照射后小肠炎性细胞相关基因表达的影响66-70
• 3 实验结果70-85
• 3.1 利用流式细胞仪建立小肠固有层细胞分析检测方法70-72
• 3.2 15Gy全身照射对小鼠小肠固有层细胞的影响72-74
• 3.3 S1P1受体调节剂对15Gy全身照射小鼠照后不同时间点小肠固有层免疫炎性细胞浸润的影响74-81
• 3.4 S1P1受体调节剂CYM5442对15Gy照射后小肠炎性细胞相关基因表达的影响81-85
• 4 讨论85-86
• 参考文献86-89
• 综述 小肠干细胞表面标志基因的研究进展89-102
• 参考文献97-102
• 致谢102-103
• 攻读学位期间发表的学术论文目录103-107

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 朱月清;小肠损伤153例诊治体会[J];交通医学;2000年06期

2 黄佳军,栾响,仇世钦;小肠损伤的诊断与治疗分析[J];现代诊断与治疗;2001年05期

3 王连东,王淑敏,尚宪荣,徐光玉,尹波,亓军;小肠损伤320例诊治分析[J];哈尔滨医药;2003年03期

4 毛波栋;;小肠损伤36例诊治体会[J];基层医学论坛;2012年04期

5 冯刚;;60例外伤性小肠损伤的临床诊疗[J];中国现代药物应用;2013年17期

6 贾同文;杨振东;顾宝清;;创伤性小肠损伤88例分析[J];人民军医;1981年09期

7 Green N ,吕仲虹;妇癌治疗中小肠损伤的避免[J];国外医学(临床放射学分册);1984年04期

8 李筱蕾;和平时期小肠损伤的特点与诊治[J];中华普通外科杂志;1997年05期

9 傅德纲;基层医院小肠损伤的诊治[J];腹部外科;1999年05期

10 房明艾;30例不典型小肠损伤的诊断体会[J];现代医药卫生;2000年05期

中国重要会议论文全文数据库 前4条

1 奎敬跃;;小肠损伤的诊治体会[A];玉溪市第十四届外科麻醉科学术年会论文摘要汇编[C];2004年

2 方莉;吕宾;孟立娜;张烁;吴炜烽;;不同药物干预防治大鼠NSAID相关小肠损伤的实验研究[A];第二届浙江省消化病学术大会论文汇编[C];2009年

3 陈汉卿;吕宾;陈鸣艳;张烁;;质子泵抑制剂对NSAIDs小肠损伤大鼠HO-1表达的影响[A];第二十三届全国中西医结合消化系统疾病学术会议暨消化疾病诊治进展学习班论文汇编[C];2011年

4 章燕红;孟立娜;陈姗姗;;RAS-p38MAPK信号通路介导的非甾体抗炎药相关大鼠小肠损伤的机制研究[A];第二十五届全国中西医结合消化系统疾病学术会议论文集[C];2013年

中国博士学位论文全文数据库 前3条

1 刘凤华;高温应激对猪小肠上皮细胞损伤及清凉颗粒的修复机制[D];南京农业大学;2009年

2 袁勇;缺血后处理对大鼠小肠缺血—再灌注损伤治疗的实验机制研究[D];昆明医科大学;2012年

3 陈驰;【~（18）F】-FDG-PET/CT可对骨髓、肝脏、小肠的放射后损伤进行快速分层诊断并评估预后[D];南方医科大学;2012年

中国硕士学位论文全文数据库 前4条

1 王轶伟;小肠缺血再灌注后小肠和远离器官肺脏心脏细胞凋亡机制的实验研究[D];天津医科大学;2005年

2 徐铁柱;S1P1受体调节剂对放射引起的小肠干细胞损伤及免疫炎症反应的调节作用研究[D];广西医科大学;2015年

3 罗宜辉;吲哚美辛诱导的急性小肠损伤及奥美拉唑的预防和治疗作用[D];中南大学;2008年

4 裴银霞;B7-H1、B7-H3、B7-H4在正常和X射线照射后小鼠小肠中的表达变化[D];苏州大学;2013年

，

本文编号：1101777