SPT抑制剂多球壳菌素对油酸诱导的HSC凋亡及自噬的影响

发布时间：2017-11-02 02:10

  本文关键词：SPT抑制剂多球壳菌素对油酸诱导的HSC凋亡及自噬的影响

  更多相关文章： 丝氨酸棕榈酰转移酶 多球壳菌素 肝星状细胞 凋亡 自噬

【摘要】：目的:探讨多球壳菌素阻断神经酰胺从头合成途径关键酶丝氨酸棕榈酰辅酶A转移酶(Serine palmitoyl-CoA transferase SPT)对油酸诱导肝星状细胞凋亡与自噬的影响。方法:体外培养HSC-T6细胞,应用不同浓度的油酸((0 uM、50uM、100 uM、200 uM、400 uM、600uM)培养HSC-T6细胞24h,采用MTT法检测HSC-T6细胞的增殖活力。筛选出能抑制HSC-T6细胞增殖发挥抑制作用且无明显细胞毒性的最适浓度(100 uM),进入下一步实验。实验分为对照组、油酸处理组(OA组)和不同浓度(50、100、150umol/L)Myriocin组,除对照组外,其余组均予以油酸(100umol/L)共培养HSC-T6细胞24h。1、利用MTT法检测HSC-T6细胞的增殖活力。2、通过流式细胞术检测HSC-T6细胞凋亡率。3、MDC染色法,观察荧光显微镜下HSC-T6细胞自噬溶酶体形态改变。4、利用Real-time PCR检测SPTLC2mRNA的表达。5、利用Western blot检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax的表达。6、利用Western blot检测HSC-T6细胞的标志性自噬蛋白Atg5、Beclin-1、LC3B的表达。结果:1、油酸抑制HSC-T6细胞增殖,且具有浓度依赖性。2、正常对照组、油酸处理组及不同浓度(50、100、150umol/L)Myriocin作用于HSC-T6细胞,多球壳菌素组HSC-T6细胞凋亡率高于正常对照组(P0.05),但低于油酸处理组(P0.05),且具有浓度依赖性。3、荧光显微镜结果表明:与对照组相比,油酸组及多球壳菌素组的自噬溶酶体明显增多,前者较明显;油酸组及多球壳菌素组相比,后者的自噬溶酶体明显减少,且具有浓度依赖性。4、与正常对照组比,油酸处理组SPTLC2mRNA表达水平增高具有统计学意义(P0.01),加入Myriocin后,SPTLC2mRNA表达水平较油酸处理组下降(P0.05),且具有浓度依赖性。5、与正常对照组相比,油酸上调促凋亡蛋白,Bax表达明显增加(P0.01),而抗凋亡蛋白Bcl-2表达则明显下降(P0.01),多球壳菌素处理后可逆转油酸对HSC-T6细胞的促凋亡作用,且具有浓度依赖性。6、正常对照组、油酸处理组及不同浓度(50、100、150umol/L)Myriocin组作用于HSC-T6细胞,多球壳菌素组自噬标志蛋白Atg5、Beclin-1、LC3B明显低于油酸处理组,且具有浓度依赖性,但高于正常对照组(P0.05)。结论:SPT抑制剂多球壳菌素可抑制油酸诱导的HSC-T6细胞的凋亡及自噬。
【关键词】：丝氨酸棕榈酰转移酶 多球壳菌素 肝星状细胞 凋亡 自噬
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R575.2
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-12
• 英文缩略词表12-14
• 第1章 引言14-18
• 第2章 实验材料18-22
• 第3章 实验方法22-28
• 第4章 结果28-36
• 第5章 讨论36-42
• 第6章 结论42-44
• 参考文献44-48
• 综述 自噬与慢性肝炎病毒感染的研究进展48-58
• 参考文献54-58
• 硕士期间撰写论文及获奖情况58-60
• 致谢60

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本文编号：1129515