TRAF5基因缺失通过调节辅助性T淋巴细胞介导的炎症加重小鼠实验性结肠炎

发布时间：2017-11-18 23:13

  本文关键词：TRAF5基因缺失通过调节辅助性T淋巴细胞介导的炎症加重小鼠实验性结肠炎

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【摘要】：研究背景及目的：炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)是一种慢性、复发性的肠道炎症性疾病,包括溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)和克罗恩病(crohn's disease,CD)两种类型。迄今为止,IBD的具体病因和发病机制尚未完全明确,多数学者认为其发病是遗传、环境、感染、免疫等多方面因素共同作用的结果。肿瘤坏死因子受体相关因子5(tumor necrosis factor-associated factors 5,TRAF5)是一种细胞内接头蛋白,它可与细胞表面及细胞内多种受体发生结合,从而调控下游的信号传递。研究证实,TRAF5可以有效调节辅助性T淋巴细胞(Th细胞)介导的免疫应答反应,并参与调控NF-κd3等信号通路的转导,但是TRAF5在IBD发病中的作用仍不得而知。我们的研究首次运用7RAF5基因敲除的小鼠构建DSS诱导的急性肠炎模型,以期探讨TRAF5在IBD发病中的作用及具体作用机制,从而为临床IBD的诊疗提供新策略。方法：TRAF5基因敲除小鼠及野生型小鼠给予自由饮用3%DSS溶液,连续造模7天,通过体重百分比、疾病活动度评分、结肠缩短程度、组织病理学评分及MPO活性5个方面评估结肠炎症程度;Real-Time PCR法检测肠组织中Th细胞特异性细胞因子及转录因子(Th1:TNF-α、IFN-γ、T-bet；Th2:IL-4.GATA-3； Th17:IL-17a、IL-22、ROR-α、ROR-γt) mRNA的表达水平；ELISA及免疫荧光法检测细胞因子11FN-γ、IL-4及IL-17a 在肠道中的分泌与表达；分选肠固有膜单个核细胞(LPMC),流式细胞术法检测LPMC中Th各亚群细胞的比例；Western blot法检测肠组织中p65及IκBα总蛋白及磷酸化蛋白的表达水平；免疫荧光单标法检测p65的核内定位情况,免疫荧光双标法检测肠组织中p65+CD4+及p65+CK18+细胞的表达与分布。结果：与野生型小鼠相比,TRAF5基因敲除小鼠在造模第5天时开始表现出更显著的体重下降(体重百分比,第5天：88.13±3.64%vs.97.04±2.97%,p0.01;第6天：78.41±3.25%vs.90.04±2.83%,p0.01；第7天：71.32±3.28%vs.82.98±2.63%,p0.01),并于造模第4天时开始出现疾病活动度评分的明显增高(第4天：5.4±1.8 vs.2.9±1.4,p=0.019；第5天：9.4±2.4 vs.4.7±2.6,p=0.003；第6天：11.2±0.8 vs.9.0±1.1,p=0.001；第7天：11.8±0.6 vs.10.4±1.1,p=0.018);另外,TRAF5基因敲除小鼠DSS诱导后结肠缩短更明显(结肠长度,46.9±29 mm vs. 55.2±2.5 mm,p0.01),肠组织病理学评分更高(7.50±0.53 vs.5.60±1.07,p0.01),MPO活性更强(1.58±0.62 vs.1.01±0.19 U/g组织,p0.05)；Real-Time PCR的结果显示,TRAF5基因敲除小鼠造模后肠组织IFN-γ、IL-4、IL-17a、T-bet及GATA3 mRNA的表达较野生型小鼠显著增高,而两组小鼠之间Th17细胞相关的转录因子ROR-α及 ROR-yt mRNA的表达却无明显差异；ELISA及免疫荧光的结果表明,TRAF5基因缺失可以明显促进结肠炎小鼠肠组织中细胞因子IFN-γ、IL-4及IL-17a的分泌与表达；流式细胞术的结果提示,TRAF5基因缺失可以显著增加造模小鼠肠道固有膜中Th2细胞及IFN-γ+IL-17a+CD4+T细胞的比例;Western blot结果显示,与野生型小鼠相比,TRAF5基因敲除小鼠DSS诱导后肠组织P-p65、T-p65及P-IκBα蛋白的表达明显增高,差异有统计学意义(p0.05)；免疫荧光单标的结果表明,TRAF5基因缺失可以显著促进造模小鼠肠道p65的核内移位；免疫荧光双标的结果显示,DSS诱导的TRAF5基因敲除小鼠肠组织中p65+CD4+细胞的表达较野生型小鼠显著增高,而两组小鼠之间p65+CK18+细胞的表达却无明显差异。结论：我们的研究发现,TRAF5基因缺失可以显著加重DSS诱导的小鼠结肠炎症,增强造模小鼠肠道固有膜中Th2细胞及IFN-y+IL-17a+CD4+T细胞的反应,同时促进肠道CD4+T淋巴细胞中NF-κB信号的激活。因此我们推断,TRAF5基因在小鼠实验性结肠炎的发病过程中可能发挥抗炎作用,TRAF5基因缺失导致DSS诱导的结肠炎的加重可能与其对Th细胞的调节作用有关,作用于TRAF5将为临床上IBD的诊疗提供新策略。
【学位授予单位】：武汉大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R574.62

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本文编号：1201493