锌α2糖蛋白对LPS干预的HepG2的JNK炎症信号通路的影响

发布时间：2017-11-24 13:19

  本文关键词：锌α2糖蛋白对LPS干预的HepG2的JNK炎症信号通路的影响

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【摘要】：目的:重组锌alpha2糖蛋白(Zinc alpha2 glycoprotein,ZAG)质粒瞬时转染Hep G2细胞,观察Hep G2细胞过表达ZAG后对肝细胞的肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)和白介素1β(Interleukin-1beta,IL-1β)表达的影响以及探讨脂多糖(LPS)干预对Hep G2细胞和Hepa1-6细胞的ZAG、法尼酯受体(Farnesoid X receptor,FXR)、脂肪细胞因子Adiponectin表达的影响。方法:1.体外培养Hep G2细胞,用浓度分别为1μg/ml、2μg/ml、3μg/ml、4μg/ml、5μg/ml的ZAG质粒转染Hep G2细胞48小时后,Western blot检测ZAG蛋白表达情况。2.体外培养Hep G2细胞,用过表达ZAG质粒(p IRES2-h ZAG)和空白质粒(p IRES2-GFP)分别经脂质体2000转染Hep G2细胞48h后,Western blot检测TNF-α、IL-1β蛋白表达情况。3.体外培养Hep G2以及Hepa1-6细胞,用LPS分别干预Hep G2和Hepa1-6细胞0h、1/2h、1h、2h、6h、12h、24h、48h,Western blot检测ZAG、FXR以及Adiponectin蛋白的表达情况。结果:1.4μg/ml组ZAG质粒转染Hep G2细胞后,能显著增加ZAG蛋白的表达。2.与p IRES2-GFP组相比,p IRES2-h ZAG组中炎症因子TNF-α表达降低(p0.05),炎症因子IL-1β表达降低(p0.01)。3.用LPS分别干预Hep G2和Hepa1-6细胞不同时间,在LPS(1μg/ml)干预下,Hep G2细胞中ZAG在干预1h表达增加(p0.05),干预12h、24h、48h时ZAG表达明显降低(p0.01);FXR在12h、24h、48h表达降低(p0.05);Adiponectin在6h、12h、24h、48h表达明显降低(p0.01)。而Hepa1-6细胞中ZAG在LPS干预1h表达增加(p0.05),干预6h、12h、24h、48h表达降低(p0.05);FXR在12h、24h、48h表达降低(p0.05);Adiponectin在6h、12h、24h、48h表达降低(p0.05)。结论:1.过表达ZAG可降低Hep G2细胞中炎症因子TNF-α及IL-1β蛋白表达。2.LPS干预Hep G2细胞和Hepa1-6细胞,ZAG、FXR、Adiponectin均在干预12小时以后表达减少。目的:探讨锌alpha2糖蛋白ZAG对LPS诱导的Hep G2细胞JNK炎症信号通路的影响。方法:1.体外培养Hep G2细胞和Hepa1-6细胞,用LPS分别干预对照组、空白质粒组、ZAG过表达组12小时,Western blot检测ZAG、FXR、Adiponectin蛋白的表达情况。2.用六孔板培养Hep G2细胞,过表达ZAG质粒和空白质粒分别经脂质体2000转染Hep G2细胞48h后,并分别用LPS以及LPS联合JNK抑制剂SP600125干预,Western blot检测JNK、P-JNK、C-jun、P-cjun蛋白的表达。结果:1.Western blot结果显示:与control组相比,LPS组以及LPS+p IRES2-GFP组ZAG表达明显降低(p0.01),与LPS+p IRES2-GFP组相比,LPS+p IRES2-h ZAG组ZAG表达增加(p0.05);与control组相比,LPS组以及LPS+p IRES2-GFP组FXR及Adiponectin表达降低(p0.05)。2.Western-blotting结果显示:与p IRES2-GFP组相比,p IRES2-h ZAG组各组JNK蛋白表达无明显变化(p0.05),在p IRES2-GFP组中,与control组相比,LPS干预组中P-JNK蛋白表达增加(p0.05),LPS+SP600125联合干预组与LPS干预组相比,P-JNK蛋白表达降低(p0.05),与p IRES2-GFP组相比,p IRES2-h ZAG组中LPS+SP600125干预组P-JNK蛋白表达降低(p0.05)。3.Western-blotting结果显示,在p IRES2-GFP组中,与control组相比,LPS干预组中C-jun及P-cjun蛋白表达增加(p0.05),LPS+SP600125联合干预组与LPS干预组相比,C-jun及P-cjun蛋白表达降低(p0.05),与p IRES2-GFP组相比,p IRES2-h ZAG组中LPS+SP600125干预组C-jun及P-cjun蛋白表达降低(p0.05)。结论:1.过表达ZAG能降低P-JNK、C-jun及P-cjun蛋白的表达,在JNK抑制剂SP600125和LPS联合作用下,ZAG能增强JNK抑制剂SP600125的抑制作用,从而降低P-JNK、C-jun及P-cjun蛋白表达。
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R575.5

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本文编号：1222390