氯化铵对大鼠海马神经元生长的影响

发布时间：2017-12-10 03:08

  本文关键词：氯化铵对大鼠海马神经元生长的影响

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【摘要】：目的:建立大鼠海马神经元的氨中毒模型模拟肝性脑病的氨中毒,观察不同氨浓度氨对体外培养海马神经元的形态学、微丝的影响,为阐明肝性脑病患者中枢神经功能失调的机制提供理论依据及新思路。方法:1.提取大鼠海马组织,培养原代大鼠海马神经元,培养至第7天加入不同浓度的NH_4CL(培养基中NH_4CL终浓度分别为0.125、0.5、1.0、5.0mmol/L),24小时后,利用荧光显微观察各组神经元形态的变化,用IPP软件统计各组海马神经元突起长度,根据神经元改变,选择合适的氨浓度,建立氨中毒模型模拟肝性脑病。2.培养至第7天的海马神经元加入不同浓度的NH_4CL培养24小时后,用钙黄绿素-乙酰乙酸酯(AM)染色,观察海马神经元生长情况,鉴定神经元的存活情况。3.海马神经元培养至第9天加入NH_4CL(培养基中NH_4CL终浓度1mmol/L),24小时后用罗丹明标记的鬼笔环肽染色,用荧光显微镜及激光共聚焦显微镜观察神经元内F-actin的改变并拍照,用IPP软件统计F-actin的荧光强度,用Image-J软件对海马神经元行Sholl分析并统计神经元突起分布情况。结果:1.正常对照组神经元生长良好,细胞胞体饱满,突起轮廓清晰,连接成网状结构;0.125 mmol/L NH_4CL组海马神经元与正常对照组无明显差别,随着浓度的增加,神经元胞体内出现黑色颗粒,细胞核皱缩、破裂,神经元突起僵硬曲张、断裂,甚至消失,5mmol/L组出现大量神经元凋亡;神经元突起长度随NH_4CL浓度的升高而降低,5mmol/L组神经元突起长度与对照组具有统计学意义(P0.05),0.125、0.5、1.0mmol/L组神经元长度与对照组比较不具有统计学意义(P0.05);2.用钙黄绿素-AM染色鉴别存活的海马神经元,结果显示对照组海马神经元形态基本与倒置显微镜所见一致,神经元生长良好,荧光染色强,5mmol/L NH_4CL组海马神经元经钙黄绿素染色后,染有绿色荧光的神经元较少,且荧光强度较弱,存活神经元的细胞密度降低(P0.05);3.用鬼笔环肽对海马神经元染色观察F-actin,对照组海马神经元F-actin成束状整齐分布于突起及胞体。氨中毒组,F-actin排列紊乱、结构破坏,细胞趋于凋亡,F-actin荧光强度降低,差别有统计学意义(P0.05);氨中毒组神经元细胞的突起的数量较对照组有着明显下降(P0.05)。结论:1.成功分离培养大鼠海马神经元;2.高浓度的氨对体外培养的原代海马神经元生长有抑制作用,并诱导神经元凋亡;3.氨中毒组大鼠海马神经元F-actin荧光强度降低,微丝束状结构被破坏,结构紊乱、排列无序,提示氨中毒可导致F-actin异常解聚;氨中毒组神经元细胞突起的数量减少,表明氨中毒可能在神经元形态发育过程中有抑制作用。
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R575.3

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