过氧化氢在肝硬化门静脉高压症高动力循环中的作用

发布时间：2017-12-10 09:13

  本文关键词：过氧化氢在肝硬化门静脉高压症高动力循环中的作用

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【摘要】：门静脉高压症(portal hypertension,PHT)是肝硬化的严重并发症之一。其始动因素是肝内阻力增加,继发因素是门静脉系统的高血流量维持着门静脉的高压状态。这进一步导致门体侧支循环广泛形成,这些侧支血管虽然在一定程度上减少了门静脉血流,但由于内脏血流量的增加,最终形成内脏高动力循环。PHT时内脏高血流动力循环至少部分依赖血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)介导的血管增生。研究表明,应用VEGF受体-2(VEGF receptor-2,VEGFR-2)阻滞剂能显著抑制门静脉部分结扎(partial portal vein ligation,PPVL)大鼠门体侧支循环的建立,降低内脏器官血流量,改善大鼠内脏高动力血流状态。然而,PHT时调节VEGF介导的内脏血管增生的机制仍不清楚。研究表明,过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)参与调节VEGF介导的血管增生。我们前期研究也发现,PHT大鼠体内H2O2水平显著高于正常对照组,降低体内H2O2水平显著改善PHT大鼠肠系膜微动脉对缩血管物质的低反应性,缓解内脏高动力循环状态。并且,PHT时机体氧化应激水平增高,活性氧(reactive oxygen species,ROS)如超氧阴离子(O2·-)产生显著增加,NAD(P)H氧化酶抑制剂(apocynin)能显著降低氧化应激水平,减少门体分流,改善内脏高动力循环,并下调肠系膜VEGF、VEGFR-2和血小板-内皮细胞粘附分子(platelet endothelial cell adhesion molecule-1,PECAM-1/CD31)蛋白表达。CD31是血管密度的标志,其水平的下调,也意味着经apocynin处理后的PHT大鼠,其肠系膜血管增生受到显著抑制。那么,H2O2作为另一种形式的ROS,其在PHT内脏血管增生以及门体侧支循环建立过程中的作用及机制值得进一步探索。本研究采用CCL4诱导肝硬化大鼠模型,以H2O2为阻断靶点,观测大鼠血流动力学及VEGF等蛋白表达水平的变化,探讨H2O2对PHT内脏血管增生和侧支循环建立的影响机制。第一部分:CCL4诱导肝硬化PHT大鼠模型的制备目的:注射CCL4油溶液诱导肝硬化PHT大鼠模型。方法:雄性SD大鼠简单随机分为正常对照组(N组)和肝硬化门静脉高压组(PHT组),PHT组背部皮下注射50%的ccl4油溶液,0.5ml/100g大鼠体重,每周注射两次,连续16周,同时间断饮用5%乙醇;n组以同样的方式和剂量在背部皮下注射生理盐水。16周后,测定门静脉压力(portalveinpressure,pp)、平均动脉压(meanarterialpressure,map)和心率(heartrate,hr);并进行肝脏组织切片he染色。结果:(1)大体观:pht组大鼠体重较n组大鼠低,精神不佳,毛发稀疏脱落,肝脏可见弥漫性结节,质地坚韧,腹腔可见淡黄色腹水;(2)镜下观:pht组大鼠he切片可见肝脏原有结构破坏,纤维广泛增生包绕不规则再生的肝细胞,形成特征性的假小叶结构。(3)pht大鼠map显著低于n组大鼠(130.17±5.0vs107.86±10.17,p0.001);pht大鼠pp显著高于n组大鼠(15.00±1.64vs6.04±0.5,p0.001);两组大鼠心率无显著变化。结论:ccl4诱导法能够成功复制出肝硬化pht大鼠模型,且大鼠耐受性良好,无明显不良反应发生。第二部分:检测肝硬化pht大鼠血流动力学指标并研究过氧化氢在pht大鼠血流动力学中的作用目的:应用非放射性彩色微球测定大鼠血流动力学参数,研究过氧化氢对肝硬化pht大鼠血流动力学参数的影响。方法:不同组大鼠行股动脉插管、左心室插管及门静脉插管,运用dye-trak彩色微球血流测量系统测定大鼠内脏器官血流量,并通过公式计算其他血流动力学指标。结果:pht组大鼠心指数(cardiacindex,ci)、门体分流率(portosystemiccollateralvessels,pss)、门静脉血流量(portalvenousinflow,pvi)、肝内阻力(intrahepaticresistance,ihr)显著高于对照组大鼠;pht大鼠周围总阻力(totalperiphericresistance,tpr)、内脏动脉阻力(splanchnicarteriolarresistance,sar)、侧支血管阻力(portal-collateralresistance,pcr)显著低于n组大鼠;其余指标没有显著变化;经过h2o2抑制剂处理后,pht大鼠pss、pvi、显著下降,sar、pcr、门静脉阻力(portalvenousresistance,pvr)显著上升,其余指标未见显著变化。其中,h2o2抑制剂降低pvi,主要是因为抑制了肠系膜及小肠的血流量。结论:非放射性彩色微球血流量测定系统稳定可靠。肝硬化pht大鼠体内呈现明显高动力循环状态,h2o2参与肝硬化pht大鼠内脏高动力循环状态的形成。第三部分:过氧化氢影响肝硬化PHT血流动力学的机制目的:探讨H2O2影响肝硬化PHT大鼠内脏高动力循环的机制。方法:过氧化氢试剂盒测定比较大鼠内脏器官的H2O2水平,蛋白免疫印迹法测定比较大鼠肠系膜及小肠VEGF、VEGFR-2和CD31蛋白水平。结果:PHT组大鼠胃、肠系膜、小肠及结肠的H2O2水平显著高于对照组大鼠;PHT组大鼠肠系膜及小肠VEGF、VEGFR-2和CD31蛋白表达显著高于对照组大鼠;H2O2抑制剂显著降低PHT大鼠肠系膜和小肠H2O2水平,也降低了两种器官内VEGF、VEGFR-2和CD31蛋白含量。结论:H2O2参与肝硬化PHT时内脏高动力循环形成的机制和VEGF介导的内脏血管增生有关。
【学位授予单位】：上海交通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R575.2

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本文编号：1273923