利拉鲁肽对体外诱导的非酒精性脂肪肝细胞LC3Ⅱ、p62表达的影响

发布时间：2017-12-11 23:26

  本文关键词：利拉鲁肽对体外诱导的非酒精性脂肪肝细胞LC3Ⅱ、p62表达的影响

  更多相关文章： NAFLD GLP-1 自噬 LC3Ⅱ p62 利拉鲁肽

【摘要】：目的:通过观察胰高血糖素样肽-1(Glucagon-like peptide-1,GLP-1)受体激动剂利拉鲁肽干预体外诱导的非酒精性脂肪肝细胞模型,检测细胞自噬相关指标LC3Ⅱ、p62的变化,及细胞凋亡情况的变化,探讨利拉鲁肽对非酒精性脂肪肝(Nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)的治疗作用效果及机制。方法:用含10%胎牛血清(Fetal bovine serum,FBS)的DMEM培养液于体外培养人正常肝细胞-L02细胞,细胞培养基中加入油酸、棕榈酸(2:1)诱导肝脂肪变性,建立NAFLD模型。细胞分组:1)正常对照组;2)NAFLD模型组;3)NAFLD模型组+利拉鲁肽治疗组+高脂培养液组:高脂培养液中加入浓度为10nmol/L利拉鲁肽;4)NAFLD模型组+利拉鲁肽治疗组+正常培养液组:正常培养液中加入浓度为10 nmol/L利拉鲁肽;5)正常组+利拉鲁肽:正常培养液中加入浓度为10 nmol/L利拉鲁肽;各组分别干预48h,收集样品。应用全自动生化仪检测肝细胞中甘油三酯(Triglyceride,TG)的含量及上清中丙氨酸氨基转移酶(Alanine Aminotransferase,ALT)的水平,试剂盒检测丙二醛(Malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)含量,采用油红“O”染色法测定细胞内脂滴情况。采用q RT-PCR检测LC3Ⅱ、p62 mRNA的表达,Western blot检测微管相关蛋白1-轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain3,LC3)、真核细胞胞质内调控蛋白P62(sequestosome1,SQSTM1)蛋白表达的变化;采用TUNNEL分析法检测细胞凋亡情况的变化。明确利拉鲁肽改善人肝细胞系NAFLD模型疗效的部分机制。数据分析:所得数据采用SPSS 23.0软件进行统计学分析,计量资料用均数±标准差表示。实验数据均进行正态分布检验及方差齐性检验,对于符合正态分布的采用单因素方差分析(one-way ANOVA),对于不符合正态分布的采用K-W秩和检验,以P0.05认为差异有统计学意义。结果:1 利拉鲁肽对正常L02细胞的TG、ALT、SOD、MDA水平、LC3Ⅱ、p62 mRNA和蛋白表达无明显影响(P0.05)。2 与正常对照组比较,NAFLD组细胞内脂滴明显增多,TG、ALT、MDA水平升高,SOD水平降低,LC3ⅡmRNA和蛋白表达均降低,p62mRNA蛋白表达增加,凋亡指数增加,差异均有显著性(P0.05)。3 与NAFLD细胞模型组比较,NAFLD细胞模型+利拉鲁肽治疗+高脂培养液组、NAFLD细胞模型+利拉鲁肽治疗+正常培养液组细胞内脂滴明显减少,TG、ALT、MDA水平下降,SOD水平明显升高,LC3Ⅱ mRNA和蛋白表达均升高,p62 mRNA蛋白表达减少,凋亡指数下降,差异均有显著性(P0.05)。4与NAFLD细胞模型+利拉鲁肽治疗+正常培养液组比较,NAFLD细细胞胞模型+利拉鲁肽治疗+高脂培养液组内脂滴减少幅度较低,TG、ALT、MDA水平下降幅度减少,SOD水平升高,LC3Ⅱ、p62 mRNA和蛋白表达、细胞凋亡指数水平改变幅度较低,差异均有显著性(P0.05)。结论:1 在体外成功建立非酒精性脂肪肝的细胞模型;2 GLP-1受体激动剂利拉鲁肽可减轻肝细胞内脂质沉积,改善肝细胞功能。3 GLP-1受体激动剂利拉鲁肽可通过增加细胞自噬相关蛋白表达水平,改善细胞脂代谢,维持细胞稳态,减少细胞凋亡,对非酒精性脂肪肝起到治疗作用。
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R575.5

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 陈兰芳;肖亮;杨军平;;细胞自噬的分子机制及其功能[J];实验与检验医学;2014年02期

2 赵玲;徐勉;;非酒精性脂肪性肝病与脂联素及胰岛素抵抗的关系[J];微循环学杂志;2009年01期

，

本文编号：1280348