LPS通过激活TLR4诱导人肝内胆管上皮细胞上皮—间质转化

发布时间：2017-12-15 11:28

  本文关键词：LPS通过激活TLR4诱导人肝内胆管上皮细胞上皮—间质转化

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【摘要】：目的:研究Toll样受体4(TLR4)在脂多糖(LPS)诱导人肝内胆管上皮细胞(HIB ECs)上皮-间质转化(EMT)中的作用及核转录因子Snail是否与参与该过程的调控。方法:体外培养人肝内胆管上皮细胞,CON+LPS组加终浓度为2ug/ml的LPS诱导72h,CON组不作处理作为对照。倒置相差显微镜观察细胞形态变化;Real-time PC R检测上皮标记物E-cadherin,间质标记物N-cadherin、Vimentin,TLR4、核转录因子Snailm RNA表达量;Western blot检测以上各指标蛋白表达量;Transwell细胞迁移实验评估各组细胞移动能力。KD+LPS组构建TLR4 si RNA慢病毒载体,采用RN A干扰技术沉默HIBECs中TLR4,NC+LPS组空白病毒转染作为对照,转染72h后分别予终浓度为2ug/ml的LPS诱导,72h后通过上述方法观察慢病毒转染对LPS诱导的细胞形态改变,TLR4、Snail、上皮间质标记物基因表达改变的影响。结果:1.LPS诱导HIBECs 72h,CON+LPS组细胞由上皮向间叶样细胞形态改变;与CON组相比,CON+LPS组上皮标记物E-cadherin m RNA表达下调(P0.05),间质标记物N-cadherin、Vimentin m RNA表达上调(P0.05,P0.05);上述指标蛋白水平表达趋势与m RNA一致;两组细胞转移率无差异(P0.05);提示:LPS可诱导HIB ECS发生EMT。2.CON+LPS组TLR4 m RNA表达量高于CON组(P0.05);蛋白水平表达前者较高;提示:LPS可导致HIBECs中TLR4表达增加。3.CON+LPS组Snail m RNA表达量高于CON组(P0.05);蛋白水平表达前者较高;提示:LPS可导致HIBECs中Snail表达增加。4.KD+LPS组TLR4 Si RNA慢病毒转染HIBECs,TLR4 m RNA表达量较NC+L PS组降低(P0.05);蛋白水平表达量前者较低。提示:TLR4Si RNA慢病毒转染能减弱LPS诱导HIBECs中TLR4基因表达上调。5.沉默HIBECs中TLR4,KD+LPS组Snail m RNA表达量较NC+LPS组降低(P0.05)。蛋白水平表达前者较低。提示:沉默TLR4能减弱LPS诱导HIBECs中Sn ail基因表达上调。6.沉默HIBECs中TLR4,KD+LPS组细胞由上皮向间叶样细胞形态改变不明显。与NC+LPS组比较,KD+LPS组上皮标记物E-cadherin m RNA表达较高(P0.05),间质标记物N-cadherin、Vimentin m RNA表达较低(P0.05,P0.05)。两组上述指标蛋白水平表达趋势与m RNA表达一致。提示:沉默TLR4能阻断LPS诱导HIBEC s发生EMT。结论:1.LPS通过激活TLR4诱导HIBEC发生EMT;2.LPS诱导HIBECs发生EMT可能受转录因子Snail调控。
【学位授予单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R575.62

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本文编号：1291817