线粒体自噬在肝纤维化中的作用

发布时间：2017-12-19 12:17

  本文关键词：线粒体自噬在肝纤维化中的作用　出处：《河北医科大学》2016年硕士论文　论文类型：学位论文

  更多相关文章： 肝纤维化 肝星状细胞 线粒体自噬 环孢菌素A 缬氨霉素

【摘要】：肝纤维化(Liver fibrosis)是多种肝脏疾病共同的病理过程,其中一部分会进展为肝硬化和/或肝癌,死亡率高,预后差,严重威胁人类健康。肝纤维化是一种可逆性的损伤-修复过程,细胞外基质(extracellular matrix,ECM)过度沉积是促进肝纤维化进展的重要因素,而细胞外基质主要来源于肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs),因此抑制HSCs的活化是逆转肝纤维化的关键。线粒体是生产能量的主要场所,参与多种细胞生命活动,因此,线粒体稳态对维持正常的细胞功能至关重要。线粒体自噬(mitophagy)由Lemasters于2005年首次提出,主要指通过自噬的方式降解细胞内损伤或多余的线粒体,维持线粒体数量及质量的稳定,从而维持正常的细胞功能。研究显示,白藜芦醇可诱导HSCs发生线粒体自噬,表明HSCs中存在线粒体自噬现象。但线粒体自噬与肝纤维化之间的关系,目前尚无报道。本研究拟以C57BL/6雄性小鼠及人HSCs细胞株LX-2为研究对象,建立肝纤维化模型,从动物及细胞层面进行研究,探讨线粒体自噬在肝纤维化中的作用。目的:探讨线粒体自噬在肝纤维化中的作用,为肝纤维化的治疗提供新思路。方法:本实验通过腹腔注射CCl4建立小鼠肝纤维化模型并用TGF-β刺激LX-2细胞活化,分别在体内及体外观察肝纤维化形成及HSCs活化过程中线粒体自噬的变化。应用线粒体自噬抑制剂Cyclosporine A及诱导剂Valinomycin验证线粒体自噬与肝纤维化及HSCs活化之间的关系。通过检测血清中谷氨酸氨基转移酶(Alanine aminotransferase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(Aspartate transaminase,AST)的水平及肝脏组织HE染色来观察肝脏炎症程度;通过天狼星红染色观察胶原变化,通过免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)分析α-SMA的表达。用蛋白免疫印迹法(Westen blotting,WB)分析α-SMA、Collagen I、HSP60、TOM20、PINK1蛋白的表达。结果:1肝纤维化及HSCs活化过程中线粒体自噬受到抑制腹腔注射橄榄油(oil)后6 W及注射CCl4后2 W、4 W和6 W,分别留取小鼠血清及肝脏组织,并进行HE、天狼猩红及IHC染色。结果显示与oil组相比,CCl4组血清ALT及AST水平随时间延长逐渐升高;HE染色显示CCl4组肝小叶结构紊乱,炎细胞浸润,肝细胞脂肪变性及坏死严重,6 W时达到高峰;天狼星红染色及WB显示CCl4组胶原纤维随注射时间延长而增加,6 W时达到高峰;IHC及WB显示CCl4组α-SMA表达随用药时间延长增加;上述结果证实肝纤维化造模成功。WB显示在CCl4组中,代表线粒体剩余量的TOM20及HSP60表达显著增加,表明肝纤维化过程中线粒体自噬被抑制。在细胞实验中应用不同浓度梯度及时间梯度的TGF-β刺激HSCs活化,WB结果显示HSCs活化指标α-SMA及Collagen I表达增加,线粒体剩余量指标TOM20、HSP60表达增加,线粒体自噬相关蛋白PINK1表达减少,并且各指标变化呈浓度依赖性及时间依赖性,表明HSCs活化过程中,线粒体自噬减弱。2抑制线粒体自噬促进肝纤维化及HSCs活化动物实验中,与单独应用CCl4组相比,应用线粒体自噬抑制剂CsA后,小鼠肝脏TOM20及HSP60的表达增加,证明CsA能够抑制线粒体自噬。应用CsA后,与单独应用CCl4组相比,小鼠血清ALT、AST水平更高,肝小叶结构紊乱程度、炎细胞浸润、肝细胞脂肪变及坏死程度更重,胶原沉积更加明显、α-SMA表达进一步上调,表明线粒体自噬抑制剂CsA可促进肝纤维化进程。细胞实验中,与单纯TGF-β刺激组比较,应用线粒体自噬抑制剂后,线粒体剩余量标志TOM20、HSP60表达增加,线粒体自噬相关蛋白PINK1表达减少,肝纤维化指标α-SMA及Collagen I表达增加,表明抑制线粒体自噬可促进HSCs的活化。3线粒体自噬诱导剂抑制HSCs活化WB结果显示,与单纯TGF-β组比较,应用线粒体自噬诱导剂后,线粒体剩余量标志TOM20、HSP60减少,线粒体自噬相关蛋白PINK1表达增加,HSCs活化指标α-SMA及Collagen I表达减少,结果提示诱导线粒体自噬能够抑制HSCs活化。结论:在肝纤维化形成及HSCs活化中线粒体自噬受到抑制。抑制线粒体自噬能促进HSCs活化,加重肝纤维化,而诱导线粒体自噬可抑制HSCs活化。干预线粒体自噬有望成为肝纤维化治疗的新靶点。
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R575.2

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 邹圣强,齐宗利;91例非老年慢性乙型肝炎肝纤维化的诊断[J];中国基层医药;2001年04期

2 曾民德;肝纤维化的诊断和治疗[J];肝脏;2001年S1期

3 田养年,邓淑玲,张武智;中西医结合治疗肝纤维化的新进展[J];中国中医药信息杂志;2001年S1期

4 曾民德;肝纤维化的治疗及其疗效评估[J];中国中西医结合杂志;2002年05期

5 谢彦华,刘春荣;基质金属蛋白酶抑制剂与肝纤维化[J];临床荟萃;2002年08期

6 李清华,战淑慧,卞鲁岩,秦成勇,劳萍;转化生长因子-β_1和纤溶酶原激活物抑制物-1在肝纤维化中的作用及关系[J];中华消化杂志;2004年02期

7 王吉耀;重视肝纤维化的基础与临床研究[J];中华医学杂志;2005年15期

8 陆伦根,曾民德;肝纤维化的诊断和评估[J];中华肝脏病杂志;2005年08期

9 时昭红,邓长生;肝纤维化的防治研究进展[J];国外医学(内科学分册);2005年03期

10 刘克洲;侯伟;;肝纤维化的治疗策略[J];中国中西医结合杂志;2006年01期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 刘勇钢;卢建华;;瘦素与肝纤维化关系及研究方法探讨[A];中华医学会病理学分会2009年学术年会论文汇编[C];2009年

2 袁凤仪;;浅议中西医防治肝纤维化的研究[A];贵州省中西医结合学会2010年消化系病学术交流会暨非酒精性脂肪肝研究进展学习班资料汇编[C];2010年

3 杜绪胜;;肝纤维化的中西医结合研究现状[A];中国中西医结合学会第十六次全国消化系统疾病学术研讨会论文汇编[C];2004年

4 赵新颜;王宝恩;贾继东;;先天性肝纤维化的临床病理特点[A];中华医学会第十二次全国病毒性肝炎及肝病学术会议论文汇编[C];2005年

5 李骥;董培红;金益辉;卢明芹;潘发奋;王帮松;陈永平;;维生素D受体基因多态性与肝纤维化关系初步研究[A];第九次浙江省中西医结合肝病学术会议论文汇编[C];2006年

6 张磊;李俊;黄成;吕雄文;金涌;朱鹏礼;;肝纤维化逆转的机制研究[A];第十届全国生化与分子药理学术会议论文摘要汇编[C];2007年

7 徐叶进;;胰岛素样生长因子-1在大鼠肝纤维化组织中的表达及意义[A];2012年浙江省医学会肝病、感染病学学术年会暨浙江省感染科医师学术年会论文集[C];2012年

8 贾继东;;肝纤维化的发生机理及治疗进展[A];第6届全国疑难及重症肝病大会论文集[C];2011年

9 杨从意;陈英杰;程晶;李群;周大桥;;浅谈肝纤维化的临床研究进展[A];中华中医药学会第十三届内科肝胆病学术会议论文汇编[C];2008年

10 郭宇;曾华强;罗时兵;何丽珍;;中西医结合诊疗肝纤维化的几点思考[A];第十八次全国中西医结合肝病学术会议论文汇编[C];2009年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 张昀;肝纤维化可以治疗[N];健康报;2005年

2 陈斌;肝纤维化可以逆转吗？[N];大众卫生报;2007年

3 范又;肝病专家指出治疗肝纤维化中医药疗效世界领先[N];光明日报;2007年

4 陈黎明;肝纤维化[N];家庭医生报;2006年

5 通讯员 陈丽霞邋王怀民 记者 赵凤华;黄连素可能治肝纤维化[N];科技日报;2008年

6 蒋明邋通讯员 陈丽霞 王怀民;黄连素治疗肝纤维化有效果[N];健康报;2008年

7 健康时报记者 刘桥斌;测肝纤维化免穿刺[N];健康时报;2009年

8 解放军302医院肝纤维化无创诊疗中心 陈国凤 黄显斌 整理;肝纤维化检查进入无创时代[N];健康报;2009年

9 第二军医大学长征医院教授 谢渭芬　整理 王根华;阻断肝纤维化发展的链条[N];健康报;2010年

10 黄丁毅;福瑞股份：肝纤维化专科面对“做大”命题[N];医药经济报;2010年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 李俊峰;单采血浆所致慢性HCV感染20年自然史及其鞘脂组学研究[D];兰州大学;2015年

2 杜静华;微小RNAs差异表达对非酒精性脂肪性肝炎相关肝纤维化的影响及分子调控机制研究[D];河北医科大学;2016年

3 李红;探讨海珠益肝方从痰论治肝纤维化的作用及机制研究[D];湖北中医药大学;2016年

4 涂晓龙;miR-30和lincRNA-p21调控肝纤维化的作用机制研究[D];南京大学;2016年

5 朱颖炜;转染TIMP-1-shRNA基因的骨髓间充质干细胞治疗大鼠肝纤维化[D];苏州大学;2016年

6 李杨;磁共振T_2~* mapping成像及分子成像评价大鼠肝纤维化的实验研究[D];重庆医科大学;2015年

7 庄灿皇;基于近二十年文献中医药治疗肝纤维化的方药规律研究[D];广州中医药大学;2016年

8 吴鹏;姜黄素对肝纤维化的保护作用及表观遗传学机制[D];南京中医药大学;2016年

9 石磊;表皮形态发生素在HIV与HCV共感染肝纤维化中的作用及机制[D];中国人民解放军医学院;2016年

10 陈利军;经血干细胞治疗肝纤维化及其作用机制[D];浙江大学;2016年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 王静;2型糖尿病合并肝纤维化等并发症的相关危险因素分析[D];新疆医科大学;2015年

2 侯龙辉;沙棘籽油对实验性大鼠肝纤维化肝脏中TIMP-1表达的影响[D];青海大学;2016年

3 李超;Decorin对CCl_4诱导肝纤维化小鼠肝脏TGF-β1、α-SMA表达的影响[D];青海大学;2016年

4 张明晓;丙酮酸乙酯对四氯化碳诱导大鼠肝纤维化保护作用的研究[D];成都医学院;2016年

5 宗咏花;丙酮酸乙酯对胆汁淤积性肝纤维化的作用及其机制的研究[D];成都医学院;2016年

6 吴灵芝;瞬时弹性成像技术（FibroTouch）对慢性乙型肝炎肝纤维化的诊断价值[D];首都医科大学;2016年

7 苏李娜;常规肝脏多期动态增强CT扫描计算肝细胞外体积分数定量评价肝纤维化的诊断价值[D];兰州大学;2016年

8 刘晓亚;Arkadia对肝纤维化SnoN蛋白降解作用的体内外实验研究[D];首都医科大学;2016年

9 万颖;组织声学结构定量技术评估慢乙肝肝脏纤维化分级的研究价值[D];安徽医科大学;2016年

10 孔文丽;M2BPGi评估慢性丙型肝炎患者肝纤维化的临床研究[D];吉林大学;2016年

，

本文编号：1307942