1. MiR-133a，miR-1，miR-206诱导C2C12细胞成肌前体细胞及miR-133a靶基因Fox12鉴定的

发布时间：2017-12-24 19:20

本文关键词：1. MiR-133a，miR-1，miR-206诱导C2C12细胞成肌前体细胞及miR-133a靶基因Fox12鉴定的研究 2. IL-28B多态性位点及血清维生素D水平在HCV感染病人中的相关性分析研究　出处：《浙江大学》2015年博士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：背景 microRNA(miRNAs)是一种广泛存在于真核生物中小的内源性非编码RNA分子,大小约由22个核苷酸组成,这些小的miRNA通常靶向一个或者多个mRNA,通过翻译水平的抑制或断裂靶标mRNA,从而调节基因的表达,在基因转录后调节中起着重要作用。已有的研究表明miRNA在基因表达调控方面具有广泛的作用,它们参与了生物体发生、发育、细胞死亡、细胞增殖、细胞迁移,细胞分化,细胞转分化,代谢调控,凋亡,肿瘤和疾病等重要生物学过程。miRNA还广泛参与了癌症的免疫过程。最近有研究发现许多的miRNA特异表达在骨骼肌或心肌,也有一些miRNA在骨骼肌或心肌表达比其它组织丰富,这些1niRNA被称为不同的肌肉miRNA组。MiR-133a及miR-1/miR-206家族是研究最多的肌相关miRNA家族。这些miRNA在肌发育中表达上调或下调,然而还没有研究表明这些成熟的小miRNA能否促进肌细胞的分化。方法 qRT-PCR验证成熟的miRNA-1, miRNA-133a, miRNA-206, miR-1-206, miR-1-133a, miR-133a-206转染C2C12细胞48小时后,肌相关基因表达变化。miRNA-1, miRNA-133a, miRNA-206, miR-1-206,miR-1-133a, miR-133a-206转染C2C12细胞5天后,观察肌管融合,并计算融合率,免疫荧光检测MyHC蛋白表达。 miR-133a靶基因预测及验证：利用靶基因预测软件Target scan, MICRORNA及PicTar预测miR-133a靶基因,并构建pMIR-REPORT荧光报告载体验证靶基因。 qRT-PCR验证C2C12经2%马血清分化五天后,miRNAs及Fox12基因表达变化。Fox12经siRNA抑制后,C2C12分化情况观察。结果转染成熟的miR-133a, miR-1/206,及这三个miRNA之间的两两组合miR-1-133a, miR-1-206和miR-133a-206可以分化C2C12细胞成肌前体细胞。其中miR-133a-206可极大提高C2C12细胞分化过程中多核肌管的形成。并且Fox12的3'UTR是miR-133a的靶向作用位点。这些结果表明miRNA在治疗肌相关疾病中的潜在治疗应用价值,新发现的Fox12基因也可能是治疗肌相关疾病中的新靶点。由于这种分化方法不需要基因转移载体或病毒载体,没有在细胞中留下残余载体,其在生物医学研究和再生医学中将发挥巨大作用。结论成熟的miR-133a, miR-1/206,及这三个miRNA之间的两两组合miR-1-133a,miR-1-206和miR-133a-206可以分化C2C12细胞成肌前体细胞。其中miR-133a-206可极大提高C2C12细胞分化过程中多核肌管的形成。Fox12的3'UTR是miR-133a的靶向作用位点。最近,全基因组关联分析(GWAS)研究发现,慢性HCV-1型感染患者的IL-28B单核苷酸多态性位点rs12979860的基因型CC和rs8099917的基因型TT与PEG-IFN/RBV治疗获得SVR有相关性。但各个研究机构之间获得的结果并不一致,所以,我们进行meta分析估计rs12979860和rs8099917与HCV-1型感染患者经PEG-IFN/RBV治疗后获得SVR的整体关系。通过检索数据库PubMed, EMBASE, Google scholar, CNKI在2012年7月30日之前发表的所有相关研究,提取合格研究,计算比值比(OR)及相应的95%可信区间(CI)用来评估总体的相关性。各个研究之间的异质性用I2进行评估。Begg's及Egger's回归分析出版偏移。最终,合格的入选研究文献有20篇,慢性HCV-1型患者IL-28B多态性位点rs8099917基因型CC和rs12979860基因型TT与PEG-IFN/RBV治疗后获得SVR有显著相关性(OR=4.473,95%CI=3.814-5.246; OR=5.171,95%CI=4.372-6.117)。结果表明HCV-1感染患者多态性位点rs12979860基因型CC和rs8099917基因型TT可作为PEG-IFN/RBV治疗后获得SVR独立的预测因素。同时我们还进行了HCV慢性感染患者血清维生素D水平与肝纤维化严重程度相关性的系统评价。通过检索PubMed, EMBASE数据库进行相关的文献检索,时间为2013年10月前发表的所有研究文献。计算比值比(OR)及95%可信区间估计(CI)或标准偏差的平均(SD)及可信区间作为血清维生素D浓度与慢性丙型肝炎患者的肝纤维化严重程度相关性的总体评价指标。最终,分析包含了来自不同国家的8321名患者。四项研究汇总的OR值及95%可信区间为0.866(95%CI,0.649-1.157)。三项研究汇总的平均值及可信区间为-0.487(95%CI,-0.659--0.315)。其中提取平均值的各项研究之间有异质性(P=0.029；I2=71.8%),提取OR值的各项研究之间没有异质性(P=0.061；I2=55.6%)。虽然提取平均值的研究汇总结果表明低浓度血清维生素D是慢性丙型肝炎患者的肝纤维化严重程度的一个危险因素,但提取OR值的研究汇总结果表明两者之间没有相关性,所以阐明血清维生素D浓度与慢性丙型肝炎患者的肝纤维化严重程度相关性还需要进行更多的临床相关研究。
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R512.63

【参考文献】