脾切除治疗小鼠自身免疫性肝炎肝纤维化的作用和机制探讨

发布时间：2018-02-24 02:35

  本文关键词： 刀豆蛋白A 肝损伤 肝纤维化 脾切除 预防治疗 Th2细胞因子　出处：《天津医科大学》2014年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：一、脾切除对AIH小鼠肝纤维化的预防和治疗作用 目的： 通过少量多次小鼠尾静脉注射刀豆蛋白A(Concanavalin A, ConA),建立小鼠自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis,AIH)肝纤维化模型。在造模前行脾切除术,观察脾切除能否延缓小鼠AIH肝纤维化的进展。在造模后行脾切除术,观察单纯脾切除以及脾切除联合硫唑嘌呤(azathioprine, AZA)对AIH肝纤维化小鼠的治疗作用。 方法： (1)将Balb/c小鼠随机分为4组,A组、B组、C组分别经尾静脉注射10mg/kg、12.5mg/kg.15mg/kg剂量的ConA, D组为对照组注射PBS,每周一次。于注射ConA的3、5、7、9周分批处死小鼠测血清丙氨酸氨基转移酶(Alanine transaminase, ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(Aspartate aminotransferase, AST),取肝脏组织作HE及Masson染色。(2)将小鼠随机分为4组,脾切除+ConA组在造模前行脾切除术,假手术+ConA组在造模前行假手术,ConA组在造模前未处理,正常对照组。分别于注射ConA的第1、4、7周分批处死小鼠测血清ALT、AST,肝组织作HE及Masson染色。(3)将小鼠随机分为5组,脾切除治疗组在造模后予脾切除术治疗,假手术治疗组在造模后予假手术治疗,脾切除+AZA治疗组在造模后予脾切除术和AZA灌胃治疗,假手术+AZA治疗组在造模后予假手术和AZA灌胃治疗,对照组在造模后未处理。分别于治疗后第1、4、8周测血常规,肝组织作HE及Masson染色。 结果： (1)每次注射ConA后,小鼠的ALT、AST均高于对照组(P0.05),且随着注射剂量的增加,小鼠ALT、AST的升高越明显(P0.05)。病理结果显示A组第9周开始出现肝纤维化,但不明显；B组第7周有明显的肝纤维化；C组第5周出现明显肝纤维化,但该组小鼠致死率高。(2)脾切除+ConA组小鼠的ALT、AST较对照组有所升高(P0.05),但低于假手术+ConA组和ConA组(P0.05)。病理结果显示脾切除+ConA组第1、4周肝脏炎症和淋巴细胞浸润程度较假手术和对照组轻；脾切除+ConA组第7周未见肝纤维化,而假手术+ConA组和ConA组均有明显肝纤维化。(3)脾切除治疗组和脾切除+AZA治疗组小鼠的WB、PLT水平在第1周较低,于治疗后第4周达高峰,随后下降。对照组、假手术治疗组和假手术+AZA治疗组小鼠的WBC、PLT水平逐渐下降。与对照组相比,脾切除治疗组、假手术+AZA治疗组和脾切除+AZA治疗组在治疗后,肝纤维化逐渐减轻,而脾切除+AZA治疗组减轻程度最明显,且假手术+AZA治疗组小鼠死亡率高。假手术治疗组的肝脏病理表现与对照组相似,肝纤维化明显。 结论： (1) Balb/c小鼠每周一次经尾静脉注射12.5mg/kg剂量的ConA,注射7周可以建立肝纤维化动物模型。(2)脾切除能够延缓小鼠AIH肝纤维化的进展,预防肝纤维化的发生。(3)脾切除不仅对AIH小鼠的肝纤维化具有治疗作用,而且提高了硫唑嘌呤的耐受性和治疗效果。 二、脾切除对AIH肝纤维化小鼠肝脏Th2细胞因子的影响 目的： 探讨Th2细胞因子在ConA诱导的急性模型中的变化及Th2细胞因子在ConA诱导的肝纤维化模型中的变化以及脾切除对ConA诱导的肝纤维化模型Th2细胞因子的影响。 方法： (1)取36只Balb/c小鼠以15mg/kg剂量的ConA经尾静脉注射,对照组注射PBS,于注射ConA的1h、2h、4h、6h、12h、24h随机处死六只小鼠取肝脏,用RT-PCR方法检测肝脏中IL-4、IL-5和IL-13的mRNA表达水平。(2)将小鼠随机分为4组,脾切除+ConA组在造模前行脾切除术,假手术+ConA组在造模前行假手术,ConA组在造模前未处理,正常对照组。分别于注射ConA的第1、4、7周分批处死小鼠取肝脏,用RT-PCR方法检测肝脏中IL-4、IL-5和IL-13的mRNA表达水平。 结果： (1) ConA诱导的急性模型中,小鼠肝脏中IL-4、IL-5和IL-13的mRNA表达水平于注射ConA后1h开始增加,IL-4水平于6h达高峰,IL5和IL-13于2h达高峰。(2) ConA诱导的肝纤维化模型中,小鼠肝脏中IL-4、IL-5和IL-13的mRNA表达水平随注射次数的增加而升高,均于ConA注射第7周达峰。脾切除+ConA组小鼠在注射ConA后肝脏IL-4、IL-5和IL-13的表达量均高于对照组,但IL-4和IL-13的表达量明显低于ConA组(P0.05),而IL-5的表达量也低于ConA组,但两组统计无明显差异。 结论： (1)在ConA诱导的急慢性模型中,Th2细胞因子IL-4、IL-5和IL-13的表达量增加。(2)脾切除可以抑制AIH肝纤维化小鼠肝脏中Th2细胞因子的分泌,脾脏在AIH肝纤维化模型中起免疫调节作用。
[Abstract]:The effect of splenectomy on the prevention and treatment of liver fibrosis in AIH mice
Objective:
A small number of times through the tail vein injection of concanavalin A (Concanavalin A ConA), the establishment of experimental autoimmune hepatitis (autoimmune, hepatitis, AIH). The rats in the model of hepatic fibrosis before splenectomy, observe the progress of splenectomy can delay liver fibrosis in AIH mice. In the rats after splenectomy, observation of splenectomy and splenectomy combined with azathioprine (azathioprine, AZA) AIH therapeutic effect on liver fibrosis in mice.
Method锛，

本文编号：1528552