外源性瘦素对急性胰腺炎肝损伤的作用机制研究

发布时间：2018-02-25 17:38

本文关键词： 胰腺炎肝损伤瘦素核因子-κB 细胞凋亡　出处：《泸州医学院》2014年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的：通过检测外源性瘦素（Leptin）对重症急性胰腺炎（severe acutepancreatitis，SAP）模型大鼠的肝细胞凋亡指数、肝组织NF-kappaB（unclearfactor-kappa B，NF-κB）的表达的影响，以及瘦素干预后的大鼠血清肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor，TNF-α）、谷草转氨酶（Aspertateaminotransferase，AST）、谷丙转氨酶（Alanine aminotransferase，ALT）、血清淀粉酶（Amylase，AMY）的表达水平变化，探讨外源性瘦素对重症急性胰腺炎大鼠模型的肝损伤的作用机制。方法：30只雄性SD大鼠，体重在250g-300g之间，随机分为三组：假手术组、重症急性胰腺炎模型组（SAP组）、重症急性胰腺炎瘦素治疗组（leptin组）。在麻醉显效开腹后只翻动十二指肠、胰腺及其周围组织制作假手术组动物模型。SAP组及瘦素组大鼠开腹后将3.5%的牛磺胆酸钠（按照1ml/kg剂量，0.2ml/min的速度）缓慢逆行注入胰胆管中，制作SAP模型。瘦素组大鼠在关腹前给予瘦素20μg/kg腹腔注射。于假手术组和SAP组大鼠腹腔内注射与瘦素组大鼠同等剂量的生理盐水后关腹。术后各组大鼠禁食但自由饮水。术后12时处死各组大鼠，并对各组大鼠的胰腺及肝脏组织进行大体标本的观察，将肝脏组织及胰腺组织进行HE染色观察，并将肝脏HE图片进行光镜下的病理学评分，免疫组化染色法检测肝组织NF-κB的表达。抽取下腔静脉血提取血清，血清ALT、AST、AMY水平采用全自动生化仪进行检测。各实验组大鼠血清TNF-α水平采用酶联免疫测定法(ELISA）检测。采用细胞凋亡原位标记（terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling，TUNEL）法测定肝脏组织的细胞凋亡指数。以上所有的检测结果均采用SPSS12.0软件进行统计学数据分析。结果：1、各实验组大鼠死亡情况，假手术组在十二小时剖杀时无大鼠死亡。SAP组大鼠死亡3只。瘦素干预组大鼠死亡1只。2、各实验组腹腔内外观变化：（1）假手术组大鼠腹腔内未见到腹水，胰腺及肝脏组织大体标本未见到明显的形态学改变，腹腔内无皂化斑块形成，肠腔无积气。（2）SAP组胰腺组织外观呈极度水肿的灰白色，可见周围的胰腺组织坏死、出血，胰腺周围及腹腔脂肪坏死明显，组织弹性明显下降，与周围肝脏、肠管、腹壁等组织广泛粘连。肝脏组织包膜张力增高，组织脆性增加，触之易破裂，体积稍增大，表面呈暗黑红色，与胰腺组织部分粘连，粘连处包膜下可见点状出血。腹腔内较多黄红色腹水形成，肠腔广泛积气明显，部分模型胃极度扩张，其内可见较多食物潴留，肠系膜及后腹壁均可见较多皂化斑块附着。（3）瘦素组胰腺组织呈灰白色，与周围组织部分粘连，可见少量出血，周围脂肪组织坏死较SAP组明显减少，胰腺周围皂化斑块减少，肠系膜及腹腔未见到皂化斑块。肝脏组织体积无明显变化，颜色暗红、均匀，未见到出血点，与胰腺组织无明显粘连。腹腔内可见少量的淡黄色腹水，部分肠腔轻度积气，无明显胃潴留。3、各实验组胰腺组织光镜下改变：（1）假手术组胰腺组织光镜下HE染色后观察，可见光镜下胰腺组织结构完整，未见坏死灶，叶间隔及细胞间隙未见水肿、出血及炎症细胞浸润。（2）SAP组镜下可见大量炎症细胞浸润胰腺组织，明显增宽的胰腺叶间隔、小叶间隔及胰腺腺泡间隔，肿胀的胰腺腺泡细胞。大片胰腺组织出血、坏死、小叶结构紊乱，部分胰腺小叶结构消失。可在部分小叶坏死区内见到钙化灶。（3）瘦素组：部分胰腺小叶可见结构紊乱，间质内可见少量的炎细胞浸润，胰腺腺泡细胞肿胀，并可见胰腺组织存在着不同程度的出血、坏死等病理改变。与SAP组相比较，瘦素组胰腺组织坏死、出血程度及炎症细胞浸润数量均有减少，且坏死灶内未见钙化灶。4、肝脏病理学改变：（1）假手术组肝脏组织肝细胞排列整齐，细胞无水肿，细胞间隙无增宽，未见到细胞坏死及凋亡。组织间无炎症细胞浸润。（2）SAP组可见肝细胞水肿，细胞间隙增宽，可见较多细胞嗜酸性变，可见细胞点状坏死，组织间可见红细胞浸润，肝窦及汇管区可见较多量的红细胞堆积和炎症细胞浸润。（3）瘦素组肝细胞轻度水肿，细胞间隙稍增宽，，可见少量嗜酸性变细胞，未见到明显的肝细胞坏死，汇管区及肝窦炎症细胞数较SAP组明显减少。组织间未见到红细胞。5、肝细胞凋亡指数、肝组织NF-κB的表达SAP组与瘦素组均较假手术组增高（P0.05）,瘦素组较SAP组降低（P0.05）。血清AMY、AST、ALT、TNF-α值瘦素组较SAP组降低（P0.05），SAP组较假手术组增高（P0.05）。结论：1、外源性瘦素对急性胰腺炎的肝损伤起保护作用，可能通过抑制炎症反应，减轻肝细胞的凋亡程度，可能为临床治疗重症急性胰腺炎肝损伤提供新的途径。2、TNF-α在重症急性胰腺炎的肝损伤的发生及病情的演变过程中起了重要作用，通过抑制TNF-α的活化可减轻个体因炎症反应而导致的组织损伤。3、肝细胞的凋亡在SAP肝损伤中起了重要作用，外源性瘦素可能通过抑制NF-κB的表达而减轻肝细胞的凋亡程度，从而达到保护肝组织的作用。
[Abstract]:Objective : To investigate the effects of leptin on the apoptosis index , NF - kappa B ( NF - 魏B ) expression in rats with severe acute pancreatitis ( SAP ) and to investigate the effect of leptin on liver injury in rats with severe acute pancreatitis . Methods : Thirty male SD rats were randomly divided into three groups : sham operation group , severe acute pancreatitis model group ( SAP group ) , and serum amylase ( leptin group ) . The rats were divided into three groups : sham operation group , severe acute pancreatitis model group ( SAP group ) and serum amylase ( leptin group ) . The results showed that there were no obvious morphological changes in the abdominal cavity of SAP group . ( 2 ) There was no obvious change in the pancreatic tissue structure of the pancreatic tissue , but there was no obvious adhesion to the pancreatic tissue . Conclusion : 1 . The expression of TNF - 伪 plays an important role in the pathogenesis of liver injury in severe acute pancreatitis .

【学位授予单位】：泸州医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R576

【参考文献】