HCV1b基因型Core与NS4B蛋白对HepG2细胞凋亡的影响

发布时间：2018-03-21 06:34

  本文选题：丙型肝炎病毒　切入点：核心蛋白　出处：《南华大学》2014年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的： 研究丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)1b基因型核心蛋白(Core)与非结构蛋白4B(Nonstructural protein4B,NS4B)对HepG2细胞凋亡的影响，以初步探索HCV1b基因型Core、NS4B与HepG2细胞凋亡的关系及其可能的相关机制。 方法： 利用脂质体介导将HCV1b基因型Core与NS4B的重组质粒pcDNA3.1(-)-Core、pcDNA3.1(-)-NS4B分别瞬时转染HepG2细胞，同时以转染空载体pcDNA3.1(-)和未转染的HepG2细胞作对照(四组细胞分别命名为：pcDNA3.1(-)-Core组、pcDNA3.1(-)-NS4B组、pcDNA3.1(-)组及空白对照组)；转染48h后，用RT-PCR及Western Blot检测转染细胞中Core与NS4B mRNA及蛋白的表达；并在有无TNF-α的因素下，MTT法检测各组细胞的生长情况，观察Core与NS4B对HepG2细胞生长的影响；利用流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况；运用RT-PCR及Western Blot检测各组细胞中活化型Caspase-3及XIAP mRNA及蛋白的相对表达水平。 结果： 1.重组质粒pcDNA3.1(-)-Core、pcDNA3.1(-)-NS4B分别瞬时转染HepG2细胞，RT-PCR及Western Blot检测到细胞内成功表达HCV Core、NS4B mRNA及蛋白。 2.RT-PCR及Western Blot检测到未用TNF-α处理的pcDNA3.1(-)-Core组、pcDNA3.1(-)-NS4B组HepG2细胞的活化型Caspase-3的mRNA及蛋白的相对表达量均低于pcDNA3.1(-)组及空白对照组(p0.01)，XIAP的mRNA及蛋白的相对表达量均高于pcDNA3.1(-)组及空白对照组(p0.01)；用TNF-α处理的pcDNA3.1(-)-Core组、pcDNA3.1(-)-NS4B组HepG2细胞的活化型Caspase-3的mRNA及蛋白的相对表达量均高于pcDNA3.1(-)组及空白对照组(p0.01)，XIAP的mRNA及蛋白相对表达量均低于pcDNA3.1(-)组及空白对照组(p0.01)；与未使用TNF-α处理的四组细胞相比，用TNF-α处理的四组细胞的活化型Caspase-3的mRNA及蛋白的相对表达量明显升高(p0.01)，且pcDNA3.1(-)-Core组、pcDNA3.1(-)-NS4B组细胞的XIAP的mRNA及蛋白相对表达量减少(p0.01)，pcDNA3.1(-)组及空白对照组细胞的XIAP的mRNA及蛋白的相对表达量增加(p0.01)。其余组间的细胞的mRNA及蛋白的相对表达量相比较均无统计学意义(P0.05)。 3.MTT法检测到转染后1~5天，pcDNA3.1(-)-Core组、pcDNA3.1(-)-NS4B组HepG2细胞的死亡率均小于pcDNA3.1(-)组与空白对照组(p0.01)；用TNF-α处理的pcDNA3.1(-)-Core组、 pcDNA3.1(-)-NS4B组HepG2细胞的死亡率均大于pcDNA3.1(-)组与空白对照组(p0.01)；与未使用TNF-α处理的四组细胞相比，用TNF-α处理的四组细胞的死亡率明显增加(p0.01)。其余组间的细胞死亡率相比较均无统计学意义(P0.05)。 4.流式细胞术检测到pcDNA3.1(-)-Core组、pcDNA3.1(-)-NS4B组HepG2细胞凋亡率均低于pcDNA3.1(-)组及空白对照组(p0.01)；用TNF-α处理的pcDNA3.1(-)-Core组、 pcDNA3.1(-)-NS4B组HepG2细胞的凋亡率均高于pcDNA3.1(-)组与空白对照组(p0.01)；与未使用TNF-α处理的四组细胞相比，用TNF-α处理的四组细胞的凋亡率明显升高(p0.01)。其余组间的细胞凋亡率相比较均无统计学意义(P0.05)。 结论： 1.HCV1b基因型Core与NS4B蛋白能下调HepG2细胞的活化型Caspase-3的表达，上调XIAP的表达。 2.在TNF-α诱导下，HCV1b基因型Core与NS4B蛋白能上调HepG2细胞的活化型Caspase-3的表达，下调XIAP的表达，，从而促进TNF-α诱导的细胞凋亡。
[Abstract]:Objective:
Study of hepatitis C virus (hepatitis C, virus, HCV) genotype 1b core protein (Core) and non structural protein 4B (Nonstructural protein4B NS4B) on the apoptosis of HepG2 cells, to explore the genotype of HCV1b Core, the relationship between NS4B and apoptosis of HepG2 cells and its possible mechanism.
Method锛

本文编号：1642672