APOBEC3G基因多态性与慢性乙型肝炎易感性关系的研究

发布时间：2016-11-16 06:13

  本文关键词：APOBEC3G基因多态性与慢性乙型肝炎易感性关系的研究，，由笔耕文化传播整理发布。

《南方医科大学》 2013年

APOBEC3G基因多态性与慢性乙型肝炎易感性关系的研究

游志毅  

【摘要】：研究背景： 乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus, HBV)感染是全球范围内严重的公共卫生问题之一。据世界卫生组织报道,全球约20亿人具有HBV感染史,其中3.5亿人为慢性感染者。HBV感染是造成慢性肝炎、肝硬化和肝细胞癌的主要原因之一,而且每年有将近100万人由于HBV感染而最终死亡。从80年代中期以来,新发的后天获得性乙型肝炎的数量逐渐在减少,而且乙型肝炎疫苗的成功使用,也降低了急性乙型肝炎和慢性乙型肝炎的发生率。但是,HBV感染仍然是造成肝脏疾病最主要的致病因素之一。现有研究表明,生活环境、病毒特征及其宿主自身素质等方面的差异会造成乙型肝炎出现不同的疾病过程和临床结果,特别是宿主本身的年龄和性别差异或者合并HIV、HCV感染时,对疾病的发展具有相当大的影响。 由于宿主的天然免疫在机体抵御HBV感染的过程中非常关键,宿主对HBV的遗传易感性在乙型肝炎发病和预后等方面尤为重要,因此,研究乙型肝炎的宿主遗传易感性具有十分重要的意义。载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽(APOBEC)家族成员,是近年来发现的具有抗病毒作用的天然免疫分子。载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽3G (APOBEC3G)是该家族中的成员之一,又称为CEM15,它具有胞苷脱氨酶活性,诱导病毒基因组发生碱基突变,可使胞嘧啶(C)脱氨基变为尿嘧啶(U),能抑制vif缺陷(△vif)人类免疫缺陷病毒-1及HBV复制。APOBEC3G基因定位于22号染色体长臂22q12-q13.2,含有8个外显子和7个内含子,编码384个氨基酸。现有研究提示,APOBEC3G在人肝癌细胞系HepG2和HuH7中对HBV的复制有抑制作用,慢性HBV感染患者的APOBEC3G表达升高,但有关4POBEC3G基因多态性与慢性乙型肝炎易感性关系的研究目前尚未见报道,为探索APOBEC3G基因多态性与慢性乙型肝炎易感性之间可能的相关性,本研究检测了病例组和对照组中APOBEC3G基因rs185983011和rs5757465两位点的多态性分布,以期确定这两位点的多态性是否同慢性乙型肝炎发病有关。 研究目的： 1.检测APOBEC3G基因rs185983011和rs5757465两位点在人群中的多态性分布。 2.确定rs185983011和rs5757465两位点的基因型和等位基因及其频率的分布情况。 3.探讨rs185983011和rs5757465两位点的多态性与慢性乙型肝炎易感性之间的关系。 研究方法： 1.选取APOBEC3G基因序列最长的第3个外显子作为目标序列。运用Primer Premier5.0软件,在目标基因序列上下游及其内部设计引物,并进行筛选。 2.采用病例对照研究的方法。从南方医院感染内科选取159例慢性乙型肝炎患者作为病例组、186例HBsAg和HBeAg皆阴性的个体作为对照组,并分别收集各研究对象的血液样本及其临床资料。运用康为世纪试剂盒提取各自血液样本基因组总DNA。 3.应用筛选好的引物对样本基因组总DNA进行PCR扩增,并采取Sanger法对PCR产物进行测序。 4.应用Sequencher4.10.1Demo软件对测序结果进行多序列比对,寻找和确定SNP位点。 5.应用Hardy-Weinberg遗传平衡定律检验病例组和对照组基因型的平衡情况,并进行比较。 6.根据测序成功样本的峰图结果确定位点基因型和等位基因,并计算其频率。运用SPSS13.0对收集的两组样本资料的实验结果进行统计分析,探讨各位点的多态性与慢性乙型肝炎易感性的关系。 结果： 1.将成功测序的样本结果通过Sequencher4.10.1Demo软件与Genebank人类APOBEC3G标准序列(NCBI Reference Sequence:NM_021822.3)进行多序列比对,以及在NCBI dbSNP数据库中进行核对,确定了rs185983011和rs5757465两基因多态性位点。根据峰图判断突变位点的基因型和等位基因,从而得到两位点在检测人群中的多态性分布。 2. rs185983011位点的基因型和基因频率：病例组和对照组样本PCR扩增产物测序结果显示,该位点包括C/C和C/T两种基因型,其中以C/C为主(占两组研究对象总数的97.7%)。在病例组中,C/C基因型154例,占96.9%；C/T基因型5例,占3.1%。在对照组中,C/C基因型183例,占98.4%；C/T基因型3例,占1.6%。两组基因型分布运用Fisher确切概率法进行比较,结果差异没有统计学意义(x2=0.888,P=0.4780.05)。等位基因C、T在病例组中的频率分别是97.5%、2.5%；在对照组中频率分别是98.9%、1.1%。运用Fisher确切概率法对两组等位基因频率进行比较,结果差异也没有统计学意义(x2=1.041,P=0.4200.05)。rs185983011位点的基因型分布和等位基因频率在男性中和女性中、各年龄层中的分布差异均无统计学意义。 3.rs5757465位点的基因型和基因频率：病例组和对照组样本PCR产物测序结果显示,该位点包括C/C、C/T和T/T三种基因型。在病例组中,C/C基因型10例,占6.3%；C/T基因型52例,占32.7%,T/T基因型97例,占61.0%。在对照组中,C/C基因型7例,占3.8%；C/T基因型58例,占31.2%,T/T基因型121,占65.0%。对两组基因型频率进行χ2检验,结果差异没有统计学意义(χ2=1.394,P=0.4980.05)。在病例组中,等位基因C、T的频率分别是16.4%、83.6%。在对照组中,等位基因C、T的频率分别是9.7%、90.3%。对两组等位基因频率进行χ2检验,结果差异没有统计学意义(χ2=3.432,P=0.0640.05)。rs5757465基因型分布和等位基因频率在男性中与女性中、各年龄层中的分布差异均无统计学意义。 结论： 1.rs185983011位点在人群中的基因型是C/C和C/T,以C/C为主(占两组研究对象总数的97.7%),rs5757465位点在人群中的出的基因型为C/T和T/T。 2.本次研究鉴于rs185983011位点在NCBI的dpSNP数据库的基因多态数据未见报道,首次检测了rs185983011位点在中国人群中的基因型分布只有是C/C(97.7%)和C/T。虽然受样本量和抽样方法所限,该结果可能不具绝对代表性,但还是可为进一步探索和确定APOBECE3G存在于中国人群中的SNP位点及其分布提供一定的依据。 3.本研究中,rs185983011和rs5757465两位点的多态性与慢性乙型肝炎不存在相关性。可能由于样本量过小,或者研究过程出现误差造成的,也可能是这两位点多态性确实与慢性乙型肝炎没有相关性。若要进一步证明该研究结果,要考虑进行大规模、大样本、多中心的人群资料流行病学调查。

【关键词】：
【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R512.62
【目录】：

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