脐带间充质干细胞治疗终末期肝硬化的临床观察

发布时间：2016-11-16 05:08

  本文关键词：脐带间充质干细胞治疗终末期肝硬化的临床观察，，由笔耕文化传播整理发布。

《河南大学》 2011年

脐带间充质干细胞治疗终末期肝硬化的临床观察

郭俊贤  

【摘要】：肝硬化(hepatic cirrhosis)是由多种原因引起的肝脏损害,表现为肝细胞变性坏死,纤维组织增生,肝细胞结节状再生,肝小叶结构变形,血液循环途径被改建,最终导致肝硬化。根据病因分类,肝硬化主要有病毒性肝硬化、酒精性肝硬化、胆汁性肝硬化、自身免疫性肝硬化及隐原性肝硬化等。我国以病毒性肝硬化为主,其中主要为乙型肝炎病毒感染造成,很多病人无法长期规范化治疗最终致肝硬化。肝硬化病人有门脉高压和肝功能障碍,病人常因消化道大出血和肝性脑病死亡。因此,肝硬化治疗是一项长期艰巨的任务,有效的方法为肝移植,因肝脏供体少,临床工作难以大量展开,越来越多的研究者致力于研究能替代肝移植的方法,间充质干细胞成为新的方向。 间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)属于干细胞家族,主要存在于骨髓、脐带、脐血和胚胎中。因具有多向分化潜能、造血支持、免疫调控和自我复制等特点,受到人们的关注。间充质干细胞在体内或体外诱导条件下可以分化为骨、软骨、脂肪、肌肉、肌腱、神经、类肝细胞、心肌等组织细胞,连续传代后仍具有多向分化潜能,可作为理想种子细胞用于炎症病变及衰老引起的器官修复。骨髓间充质干细胞应用于临床较早,但抽取骨髓为有创性检查,增加了病人痛苦,越来越多的学者致力于研究脐带来源的间充质干细胞。脐带间充质干细胞来源广泛,收集脐带为无创操作,且治疗肝硬化有促进肝脏再生、提高患者生活质量的作用,在临床上应用越来越受到重视。 目的:制备足月顺产胎儿脐带来源的间充质干细胞,探讨体外分离、培养、鉴定 方法,观察脐带间充质干细胞治疗终末期肝硬化的临床疗效。方法:无菌条件下采集新生儿脐带,经过分离,培养获得间充质干细胞,流式细胞仪表面抗原测定(CD29、CD105、CD34、CD45);选择50例肝硬化患者,26例患者在内科治疗基础上经前臂静脉或肝动脉插管进行MSCs移植,术后定期检测肝功能、凝血功能及临床症状,并观察同期的症状体征和不良反应,同时随机选择24例仅以内科治疗的肝硬化患者做为对照组,两组间进行比较。 结果: (1)培养的脐带间充质干细胞呈长梭形、旋涡状生长。P1代消化后传代,贴壁时间约48h左右,2-3W长满80%。P6代以内的细胞增殖无明显差异。P3-P6代生长速度较快,24h贴壁,48h长满70%,72h长满80%,P3-P6代内无明显分化。 (2)细胞免疫表型显示表达间充质干细胞的特异性标记CD29;但不表达造血干细胞表面标记CD34、CD45。这与骨髓间充质干细胞的表型一致。 (3)脐带间充质干细胞移植后,治疗组ALB、PA和Fbg水平比对照组明显升高(P﹤0.05),PT时间与对照组相比明显降低(P﹤0.05)。 (4)治疗组患者从治疗后1周开始,乏力、腹胀、纳差明显好转,12周后患者腹水明显减少。26例移植患者术中未出现严重不良反应,无与移植相关的严重并发症。 结论: (1)本实验用双酶消化法分离出间充质干细胞,经过冻存、复苏后细胞损伤小,多次传代后细胞分化少,增殖能力稳定。 (2)人脐带间充质干细胞经过流式细胞仪测定后,表达间充质干细胞的表型,不表达造血干细胞表型,与骨髓来源的间充质干细胞检测一致。 (3)人脐带间充质干细胞治疗终末期肝硬化,可提高患者ALB、PA、Fbg,缩短PT,改善了患者的临床症状。 (4)人脐带间充质干细胞移植肝硬化患者,具有良好的安全性。

【关键词】：
【学位授予单位】：河南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R575.2
【目录】：

摘要4-6

ABSTRACT6-12

前言12-14

第一部分 脐带间充质干细胞的制备14-23

1.1 序言14

1.2 材料、试剂与仪器14-15

1.2.1 材料14

1.2.2 主要试剂14-15

1.2.3 主要仪器15

1.3 方法与步骤15-16

1.3.1 脐带间充质干细胞的分离、培养15-16

1.3.2 细胞冻存16

1.3.3 细胞复苏16

1.3.4 流式细胞仪检测16

1.4 结果16-19

1.4.1 细胞培养16-18

1.4.2 流式细胞仪检测18-19

1.5 讨论19-22

参考文献22-23

第二部分 脐带间充质干细胞治疗终末期肝硬化23-38

2.1 序言23

2.2 细胞来源23

2.3 脐带间充质干细胞移植治疗肝硬化患者选择23-25

2.3.1 病例入选标准23-24

2.3.2 筛选评估24-25

2.3.3 治疗分组25

2.4 治疗方法25-26

2.4.1 治疗时间25

2.4.2 移植细胞数25

2.4.3 移植途径25-26

2.4.4 术后治疗26

2.5 术后观察26-27

2.5.1 不良反应26

2.5.2 随访时间26

2.5.3 随访项目指标26-27

2.5.4 评价指标27

2.5.5 统计学处理27

2.6 结果27-33

2.6.1 临床资料27

2.6.2 肝功能和凝血功能的变化27-33

2.6.3 临床症状变化33

2.6.4 不良反应33

2.7 讨论33-37

参考文献37-38

第三部分 结论38-39

第四部分 文献综述间充质干细胞治疗终末期肝硬化的研究进展39-52

4.1 概述39

4.2 间充质干细胞（MSCs）来源39-40

4.3 间充质干细胞的培养方法40-41

4.4 间充质干细胞的特征41-46

4.4.1 间充质干细胞的形态和表面标志41

4.4.2 间充质干细胞的多向分化能力41-43

4.4.3 间充质干细胞的免疫调节作用43-44

4.4.4 间充质干细胞的致瘤性44-45

4.4.5 间充质干细胞的归巢45-46

4.5 间充质干细胞治疗终末期肝硬化46-47

4.5.1 肝脏的损伤、修复与再生46-47

4.5.2 间充质干细胞治疗肝硬化的研究47

4.6 讨论47-49

参考文献49-52

英文缩略词表52-53

致谢53-55

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