结肠粘膜NR2B通过proBDNF和mBDNF参与IBS-D内脏高敏感的发生

发布时间：2018-04-20 08:19

  本文选题：proBDNF + mBDNF　； 参考：《山东大学》2017年硕士论文

【摘要】：背景NMDA受体为一种离子型谷氨酸盐受体,由2个NR1(NMDAreceptor 1)亚基和2个NR2(NMDAreceptor 2)亚基组成。其中NR2亚基包含四个亚型(NR2A、NR2B、NR2C、NR2D)。既往研究表明NMDA受体在IBS患者肠粘膜表达增高并参与IBS内脏高敏感的发生。然而哪种NMDA受体亚型在该机制中起关键作用目前\不清楚。在本研究中,我们将探讨NMDA受体亚型在IBS-D患者内脏高敏感中的作用。然而NMDA受体并不能直接诱导内脏高敏感,需要借助受体活化后的产物。脑源性神经生长因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)具有多种功能,在神经系统神经细胞的生存,突触的可塑性和疼痛的产生中发挥重要作用。既往研究表明,NMDA受体可诱导成熟BDNF(mature BDNF,mBDNF)的合成。因此,作为合成mBDNF的中间产物,前体BDNF(the precursor of brain derived neurotrophic factor,proBDNF)也可由NMDA受体诱导产生。近期研究表明proBDNF表达于肠粘膜并具有促进炎症性、内脏性、手术性疼痛的作用。本研究将探讨proBDNF在内脏高敏感中的作用,并研究该N2亚型是否通过proBDNF参与内脏高敏感的发生。近期一项研究表明肠粘膜NMDA受体通过诱导mBDNF的产生参与内脏高敏感,然该研究并未涉及亚基探讨。因此我们将同时探讨该亚型是否也通过mBDNF参与内脏高敏感机制的发生。目的1.探讨NMDA受体哪种亚型在IBS-D患者肠粘膜表达增高并参与内脏高敏感的发生;2.探讨proBDNF在IBS-D患者肠粘膜表达情况及是否与IBS内脏高敏感相关;3.探讨NMDA受体该亚型是否通过proBDNF参与IBS-D内脏高敏感的发生;4.探讨该亚型是否通过mBDNF促进IBS-D内脏高敏感的发生。方法1.临床试验根据罗马Ⅲ标准纳入IBS-D患者及健康对照者,每位参与者完成一份信息采集及肠道功能评分量表,进行腹部疼痛/不适严重程度及频率评分。每位参与者进行结肠镜检查,于直乙交界处钳取3块肠粘膜标本,1块用于免疫组化检查,2块用于western blot检查。2.细胞试验以人结肠上皮细胞系ht-29为研究对象,分别以MK-801阻断NMDA受体以Ro25-6981特异性阻断NR2B亚型。实时荧光定量RT-PCR、western blot检测proBDNF 的表达,western blot、ELISA 检测 mBDNF 的表达。为了研究NMDA受体活化后对proBDNF及mBDNF合成的直接作用,激动剂组分为5组,分别为50 μ MNMDA与10 μ MD-丝氨酸组,100 μ MNMDA与10 μMD-丝氨酸组,500 μMNMDA与10 μMD-丝氨酸组,100 μM NMDA组,10 μMD-丝氨酸组,于3h、6h、12h、24h、48h获取细胞或培养基后进行后续实验。为了评估NR2B亚基对BDNF合成作用的影响,分别用MK-801阻断全部NMDA受体和Ro25-6981特异性阻断NR2B亚基,比较两者对proBDNF及mBDNF合成的影响。3.统计学分析两组之间计量资料的比较均采用独立样本t检验方法,分类变量的比较采取Fisher确切概率法。多组样本的比较采用单因素ANOVA分析,随后组间的两两比较采用Tukey检验。NR2B与proBDNF/mBDNF的相关性采取Pearson线性相关。proBDNF/mBDNF蛋白表达与腹部疼痛评估的相关性采取Spearman秩相关。P值小于0.05为差异有统计学意义。结果1.临床试验1)NMDA受体NR2亚基四个亚型均主要表达于肠粘膜肠上皮细胞;2)IBS-D患者肠粘膜中,NMDA受体只有NR2B亚型表达增高,且与患者腹部疼痛/不适评分及频率呈正相关;3)IBS-D患者肠粘膜中,proBDNF表达增高,且与腹部疼痛/不适严重程度评分及频率呈正相关;4)NR2B亚型表达与proBDNF的表达呈正相关;5)IBS-D患者肠粘膜中,mBDNF表达增高,且与腹部疼痛/不适严重程度评分及频率呈正相关;6)NR2B亚型表达与mBDNF表达也呈正相关。2.细胞试验在ht-29细胞,激动NMDA受体后可引起proBDNF和mBDNF表达增高,且proBDNF/mBDNF的合成量与激动剂浓度呈正相关。MK-801或Ro25-6981可使这种升高完全恢复到对照组水平,且两者在抑制效果上无统计学差异。结论1.在NR2的四个亚型中,只有NR2B在IBS-D患者肠粘膜中表达增高并与患者内脏高敏感严重程度相关;2.NR2B通过proBDNF参与IBS-D内脏高敏感的发生;3.NR2B通过mBDNF参与IBS-D内脏高敏感的发生。
[Abstract]:Background of the Invention The NMDA receptor is an ionic glutamate receptor consisting of two NR1 ( NMDAreceptor 1 ) subunits and two NR2 ( NMDAreceptor 2 ) subunits , wherein the NR2 subunit comprises four subtypes ( NR2A , NR2B , NR2C , NR2D ) . 浣撳湪IBS鎮ｈ，

本文编号：1776990