草鱼白细胞介素1β的克隆及其在肠道炎症中的功能鉴定.pdf

  本文关键词：草鱼白细胞介素1β的克隆及其在肠道炎症中的功能鉴定，由笔耕文化传播整理发布。

硕士学位论文 论文题目 草鱼白细胞介素1β的克隆及其在肠道炎症 中的功能鉴定 研究生姓 卜云璇 指导教师姓 宋学宏 专 业 名称 水生生物学 研 究 方 向 水生生物制品安全性 2015 4 论文提交日期 年 月 2 1 草鱼白细胞介素 β的克隆及其在肠道炎症中的功能鉴定 中文摘要 草鱼白细胞介素1β的克隆及其在肠道炎症中的功能鉴定 中文摘要 目的：白细胞介素-1β IL-1β）是一种促炎细胞因子，主要由活化的单核细胞和 巨噬细胞产生，可参与机体的多种生理及病理反应，在免疫细胞的成熟、活化、增殖 和免疫调节等过程中发挥重要作用。草鱼是我国重要的淡水养殖经济鱼类，但其易遭 受多种病原菌和病毒的危害，病原生物通常通过肠道进入草鱼体内，使其发生炎症乃 至死亡，造成经济损失。本研究旨在通过克隆草鱼IL-1β基因，分析其基因结构，明 确其在草鱼生理及病理条件下的各组织的表达水平，揭示该基因在肠道炎症发生过程 中的可能作用。 方法：运用RACE技术从草鱼中克隆IL-1β全长cDNA，通过pET32a + 原核表 达系统表达IL-1β融合蛋白，并经镍柱纯化获得具有生物活性的蛋白。运用qPCR技 术分别检测： 1）健康草鱼各组织的IL-1β转录水平； 2）用细菌内毒素 LPS）腹 4h 12h 24h 48h IL-1β 3 腔注射草鱼后 ， ， 和 时各组织中 相对表达量。 ）肛灌不同剂 量重组IL-1β活性蛋白后炎症发生过程中肠道组织内的IL-1β、IL-1R2和TNF-α基因 相对表达水平。以割胶纯化的草鱼IL-1β重组蛋白为免疫原，制备草鱼IL-1β多克隆抗 体，用琼脂双扩散法检测抗体的效价、Westernblot验证其特异性。采用肛灌嗜水气 单胞菌诱导草鱼产生肠道炎症，诱导 12h后肛灌20ng/尾的草鱼IL-1β多克隆抗体 rgcIL-1βpA

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