eRF3b对实验性大鼠非酒精性脂肪肝保护作用的脂肪代谢机制研究

发布时间：2018-06-17 17:59

本文选题：eRF3b + 非酒精性脂肪肝病　；参考：《河北医科大学》2017年硕士论文

【摘要】：目的:非酒精性脂肪肝病(NAFLD)的患病率逐年上升,已成为最常见的慢性肝脏疾病。根据疾病严重程度,NAFLD可包括以下类型:单纯性肝脂肪病变,非酒精性肝炎,肝纤维化,肝细胞肝癌。目前普遍认为NAFLD的发生涉及饮食、遗传、肠道微生物等因素,它们可作为“多重打击”共同影响脂肪代谢、炎症及纤维化的形成,从而引起肝毒性。本研究室前期采用飞行质谱技术在慢性肝炎、肝硬化和肝癌患者血清中检测到一种生物学标志物:真核肽链释放因子3b(eRF3b)多肽,该标志物在不同类型患者体内表达有差异。前期研究发现eRF3b对免疫性肝损伤、肝纤维化均有保护作用。基于本实验室前期关于eRF3b对NAFLD保护性作用的研究,发现eRF3b可减轻高脂饮食联合四氯化碳导致的大鼠肝内脂肪沉积,改善血清学和组织病理学指标,但是eRF3b发挥保护作用的具体分子机制尚不明确,所以本次研究主要通过腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)通路、过氧化物酶体增殖物激活受体/肝X受体(PPAR/LXR)通路和磷脂酰肌醇-3激酶/苏氨酸蛋白激酶(PI3K/Akt)通路来探索eRF3b对非酒精性脂肪肝病的保护作用的脂肪代谢机制,从而为非酒精性脂肪肝病的治疗提供实验室依据。方法:1脂肪代谢通路相关因子基因表达水平变化:应用q RT-PCR方法测定正常组、模型组、eRF3b 100μg/kg组、200μg/kg组、400μg/kg组、西药(复方甘草酸苷)对照组、中药(降脂通络软胶囊)对照组冻存肝组织中AMPK通路相关指标adiponectin、LKB1、AMPKα1、AMPKα2、ACC、CPT1、SREBP-1c、FAS、PNPLA3;PPAR/LXR通路指标PPARα、PPARγ、LXRα;炎症、纤维化与细胞增殖指标IL-6、TGF-β1、collagen1、PCNA的基因表达水平。2几种相关因子蛋白水平的变化:应用Western-blot方法测定正常组、模型组、eRF3b 100μg/kg组、200μg/kg组、400μg/kg组、复方甘草酸苷组、降脂通络软胶囊组冻存肝组织中的p-AMPKα/AMPKα、PI3K、p-Akt/Akt蛋白表达水平。结果:1各组AMPKα的基因及蛋白表达水平q RT-PCR结果显示模型组与正常组比AMPKα1、AMPKα2 mRNA相对表达均降低(P0.01),eRF3b 100μg/kg、200μg/kg、400μg/kg组、复方甘草酸苷组、降脂通络软胶囊组与模型组比,AMPKα1、AMPKα2 mRNA相对表达均升高(P0.01)。eRF3b 200μg/kg组AMPKa1和AMPKα2 mRNA表达高于复方甘草酸苷组和降脂通络软胶囊组(P0.05)。Western-blot结果显示模型组p-AMPKα/AMPKα蛋白相对表达量低于正常组(P0.01),eRF3b 200μg/kg组与模型组比p-AMPKα/AMPKα蛋白相对表达量升高(P0.05)。2各组AMPK上游基因的表达水平与正常组比,模型组adiponectin与LKB1 mRNA相对表达量均降低(P0.05),eRF3b 200μg/kg组adiponectin和LKB1 mRNA相对表达量均高于模型组(P0.01)。3各组脂肪酸氧化相关基因的表达水平与正常组比,模型组ACC mRNA相对表达升高,CPT1 mRNA相对表达降低(P0.001)。与模型组比,eRF3b 100μg/kg、200μg/kg、400μg/kg组、复方甘草酸苷组、降脂通络软胶囊组ACC mRNA相对表达量降低,CPT1 mRNA相对表达升高,且eRF3b 400μg/kg组ACC mRNA表达低于与复方甘草酸苷组(P0.05)。4各组脂肪酸合成相关基因的表达水平与正常组比,模型组SREBP-1c、PNPLA3、FAS mRNA相对量表达均升高(P0.05)。与模型组比,eRF3b 100μg/kg、200μg/kg、400μg/kg组、复方甘草酸苷组、降脂通络软胶囊组SREBP-1c、FAS、PNPLA3 mRNA表达均降低(P0.05),且eRF3b 200μg/kg组和400μg/kg组SREBP-1c mRNA水平低于复方甘草酸苷组(P0.05)。5各组PPAR/LXR通路的基因表达水平正常组、模型组、eRF3b 100μg/kg组、200μg/kg组、400μg/kg组、复方甘草酸苷组、降脂通络软胶囊组的PPARα与LXRα基因相对表达水平均无差异(P0.05)。模型组PPARγmRNA水平高于正常组(P0.001),与模型组比,eRF3b 200μg/kg组与降脂通络软胶囊组PPARγmRNA相对表达量降低(P0.05)。6各组PI3K/Akt通路的蛋白表达水平Western blot结果显示,正常组、模型组、eRF3b 100μg/kg、200μg/kg、400μg/kg组、复方甘草酸苷组、降脂通络软胶囊组PI3K和p-Akt/Akt的蛋白相对表达量均无统计学差异(P0.05)。7各组炎症、纤维化及细胞增殖相关基因的表达水平与正常组比,模型组IL-6、TGF-β1、collagen1 mRNA相对表达均升高(P0.01)。与模型组比,eRF3b 100μg/kg、200μg/kg、400μg/kg组、西药组、中药组IL-6和TGF-β1 mRNA表达降低(P0.05);eRF3b100μg/kg、200μg/kg组、复方甘草酸苷组、降脂通络软胶囊组collagen1mRNA表达降低(P0.01),且eRF3b 200μg/kg组IL-6和collagen1基因水平低于复方甘草酸苷组和降脂通络软胶囊组(P0.01)。各组PCNA的基因表达无统计学差异(P0.05)。结论:1 eRF3b可能通过激活AMPK通路,降低肝内PPARγ的表达而改善脂代谢并减轻由高脂饮食联合四氯化碳引起的大鼠肝脏炎症反应与纤维化的发生,发挥对脂肪肝的保护作用。2 eRF3b上调AMPK通路的机制可能是通过增加adipoenctin与LKB1的表达而激活AMPK,继而增加脂肪酸氧化并减少脂肪酸合成,从而减少肝内脂肪堆积。3 eRF3b对脂肪肝的治疗作用可能与PPARα/LXRα和PI3K/Akt通路无关。
[Abstract]:Objective : To explore the protective effect of eRF3b on non - alcoholic fatty liver disease . Results : The relative expression of AMPK 伪 / AMPK 伪 protein in the group of eRF3b 200 渭g / kg , 200 渭g / kg , 400 渭g / kg , 400 渭g / kg , 400 渭g / kg , 400 渭g / kg , 200 渭g / kg , 400 渭g / kg , 400 渭g / kg , 200 渭g / kg , 400 渭g / kg group , and lower fat Tongluo soft capsule group were higher than those in the model group ( P0.05 ) . Compared with the normal group , the expression levels of PPAR纬 mRNA in the group of eRF3b 200 渭g / kg , 200 渭g / kg , 400 渭g / kg , 200 渭g / kg , 400 渭g / kg , 400 渭g / kg , 200 渭g / kg , 400 渭g / kg , 200 渭g / kg , 400 渭g / kg , 400 渭g / kg , 200 渭g / kg , 400 渭g / kg , 200 渭g / kg , 400 渭g / kg , 400 渭g / kg , respectively . 1 eRF3b may improve lipid metabolism by activating AMPK pathway , reduce the expression of PPAR纬 in the liver , and reduce the inflammatory response and fibrosis of rat liver caused by high - fat diet combined with carbon tetrachloride . The mechanism of up - regulating AMPK pathway by eRF3b may be to activate AMPK by increasing the expression of enctin and LKB1 , then increase fatty acid oxidation and reduce fatty acid synthesis , thereby reducing fatty acid accumulation in the liver . The therapeutic effect of 3 eRF3b on fatty liver may not be related to PPAR伪 / LXR .
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R575.5

【参考文献】