1信号通路在小鼠实验性结肠炎中的作用

发布时间：2016-12-13 13:22

  本文关键词：Tim-1信号通路在小鼠实验性结肠炎中的作用，由笔耕文化传播整理发布。

《南昌大学》 2012年

Tim-1信号通路在小鼠实验性结肠炎中的作用

王萍  

【摘要】：背景与目的: 炎症性肠病（IBD）的发病机制和病因非常复杂，我们的前期研究和文献报道发现TLR信号通路和Th免疫反应的异常在其中起着十分重要的作用，并且这些异常在不同类型的IBD（CD和UC）中有所不同，但是其发生机制尚不明确。为何不同类型的IBD会出现不同的Th优势反应，，它们的调控机制不清楚。Tim-1信号通路是最新发现的调节Th免疫反应的核心环节，并且与TLR信号通路有着密切的关系。然而Tim-1信号通路在IBD发生发展中的作用，及它与IBD的Th免疫反应和TLR信号通路变化的关系国内外尚未见报道。为此，本文研究不同类型的小鼠实验性结肠炎（分别类似人类的UC和CD的动物模型）Tim-1信号通路的变化及其与调节性T细胞（Treg）和TLR信号通路的关系，并以此为干预靶点，分别观察Tim-1信号通路对不同类型小鼠实验性结肠炎的Treg细胞和TLR信号通路的影响，及其与疾病的的关系，从这一新的角度来探讨IBD的发病机制，为IBD的防治提供新的靶点和方向。 方法: 1．实验分组 (1) Tim-1抗体未处理小鼠组；(2)Tim-1抗体预处理小鼠组； 每组内再分为：①正常对照组；②D SS模型组；③TNBS模型组。 2．小鼠实验性结肠炎模型的建立 (1)DSS诱导小鼠实验性结肠炎模型的建立：BALB/c小鼠自由饮用5%DSS溶液7天，建立小鼠急性结肠炎模型。 (2)TNBS诱导小鼠实验性结肠炎模型的建立：BALB/C小鼠禁食、不禁饮24小时后，乙醚麻醉，用3.5F导管从肛门插入肠道深约5.5cm处，灌注TNBS/50%乙醇溶液100μ1(含2mg TNBS的50%乙醇溶液)，之后将小鼠倒置60秒。从造模第一天开始，每日观察并记录各组小鼠体重、大便性状，7天后处死小鼠。 (3)小鼠Tim-1信号通路的干预：小鼠建模前12h，腹腔内注射100μg抗-Fc抗体消除非特异性吸附后，再给予250μg抗-Tim-1Ab腹腔注射，对照小鼠给予同等剂量的IgG2a。 3.观察以下各项指标： (1)各组小鼠每天的体重变化、结肠炎疾病活动指数（DAI积分）； (2)肉眼观察小鼠结肠大体形态改变，HE染色观察小鼠结肠炎病理组织学损伤程度； (3)Western blot法检测小鼠结肠组织中Foxp3、MyD88、SIGIRR、Tim-1蛋白的表达； (4)免疫组织化学染色检测小鼠结肠组织中Foxp3、MyD88、SIGIRR、NF-κBp65蛋白的表达。结果： 1.各组小鼠体重变化及DAI积分 实验第5、7天，各模型组小鼠体重下降百分比均显著高于相应的对照组(P0.01)。在Tim-1抗体预处理组中，DSS组小鼠体重下降百分比显著高于TNBS组(P0.01)。小鼠体重变化在Tim-1抗体未处理组和预处理组之间有差异，仅实验第7天DSS组间差异有统计学意义(P0.05)，其余组间差异无统计学意义（P0.05）。 在实验第5、7天，无论是Tim-1抗体未处理组还是预处理组中，模型组小鼠DAI积分均显著高于相应对照组(P0.01)。Tim-1抗体预处理的各组小鼠DAI积分均高于未处理组，但都无统计学意义（P0.05）。 2.小鼠肠黏膜大体形态和结肠组织病理变化 (1)无论是Tim-1抗体未处理组还是预处理组，对照组小鼠结肠黏膜呈淡红色、光滑完整，未见充血、水肿、糜烂、溃疡，DSS组和TNBS组小鼠结肠黏膜可见充血、水肿、糜烂。 (2)无论是在Tim-1抗体未处理组还是预处理组，模型组小鼠的结肠炎症程度、病变深度、隐窝破坏均显著高于对照组(P0.01)。Tim-1抗体预处理的各组小鼠病理组织学损伤程度均高于未处理组，但只有DSS组间差异有统计学意义（P0.05）。 3.小鼠结肠组织中Foxp3的表达 (1)免疫印迹检测发现，在Tim-1抗体未处理组中，模型组Foxp3蛋白的表达低于对照组，但无统计学意义（P0.05）。在Tim-1抗体预处理组中，对照组Foxp3蛋白的表达显著高于两个模型组（P0.01）。Foxp3蛋白表达在Tim-1抗体未处理组和预处理组之间的差异无统计学意义（P0.05）。 (2)免疫组化染色发现，无论是在Tim-1抗体未处理组还是预处理组中，对照组Foxp3阳性炎细胞数显著高于模型组（P0.01）。Tim-1抗体预处理的各模型组Foxp3阳性细胞数均低于未处理小鼠，但只有DSS组间差异有统计学意义（P0.05）。 4.小鼠结肠组织中SIGIRR的表达 (1)免疫印迹检测发现，在Tim-1抗体未处理组中，对照组SIGIRR蛋白表达高于模型组（P0.01，0.05），DSS组高于TNBS组（P0.05）。在Tim-1抗体预处理组中，对照组显著高于DSS组（P0.01）。SIGIRR蛋白的表达在Tim-1抗体未处理组和预处理组之间的差异无统计学意义（P0.05）。 (2)免疫组化染色发现，无论是在Tim-1抗体未处理组还是预处理组中，对照组SIGIRR蛋白的表达显著高于模型组（P0.01）。SIGIRR蛋白的表达在Tim-1抗体未处理组和预处理组之间的差异无统计学意义（P0.05）。 5.小鼠结肠组织中Myd88的表达 (1)免疫印迹检测发现，无论是在Tim-1抗体未处理组还是预处理组中，对照组Myd88蛋白的表达显著低于模型组（P0.01），DSS显著组高于TNBS组（P0.01）。Myd88蛋白的表达在Tim-1抗体未处理组和预处理组之间的差异无统计学意义（P0.05）。 (2)免疫组化染色发现，无论是在Tim-1抗体未处理组还是预处理组中，对照组Myd88蛋白的表达显著低于模型组（P0.01），在Tim-1抗体预处理组中，DSS组还显著高于TNBS组（P0.01）。同时Tim-1抗体预处理的各模型组MyD88的表达高于未处理组，但只有DSS组间差异有统计学意义（P0.05）。 6.小鼠结肠组织中Tim-1的表达 免疫印迹检测发现，在Tim-1抗体未处理组中，对照组Tim-1蛋白的表达显著高于模型组（P0.01）；在Tim-1抗体预处理组中，对照组Tim-1蛋白表达均高于模型组，对照组和TNBS组之间有显著差异（P0.01），但对照组和DSS组之间差异无统计学意义（P0.05），DSS组显著高于TNBS组（P0.05）。在对照组和DSS组中，Tim-1抗体未处理组的Tim-1蛋白表达均显著低于预处理组（P0.01）。 7.小鼠结肠组织中NF-κB p65的表达 免疫组化染色发现，无论是在Tim-1抗体未处理组还是预处理组中，对照组NF-κB p65蛋白表达显著低于两个模型组（P0.01）；在Tim-1抗体预处理组中，DSS组的表达还显著高于TNBS组（P0.05）。Tim-1抗体预处理的各模型组NF-κB p65表达均高于未处理组，但只有DSS组间差异有统计学意义（P0.01）。结论： 1.本研究成功的建立了DSS及TNBS诱导的实验性结肠炎小鼠模型，并且Tim-1抗体预处理可加剧小鼠实验性结肠炎的肠黏膜病变，提示了Tim-1信号通路参与了小鼠实验性结肠炎的发病。 2. Tim-1抗体预处理后小鼠实验性结肠炎肠黏膜中Foxp3蛋白表达降低，提示Tim-1抗体可能通过调控Treg细胞反应来影响小鼠结肠炎的发生。 3. Tim-1抗体预处理后小鼠实验性结肠炎肠黏膜中NF-κB p65、MyD88蛋白表达上升，提示Tim-1抗体可能通过激活TLRs/NF-κB信号通路来影响小鼠实验性结肠炎的发生。

【关键词】：
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R574.62
【目录】：

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1 王皓,欧阳钦,胡仁伟;三硝基苯磺酸结肠炎动物模型的建立[J];胃肠病学;2001年01期

2 夏冰;;炎症性肠病的病因与发病机制[J];世界华人消化杂志;2001年03期

3 欧阳钦;提高炎症性肠病的研究和诊治水平[J];中华内科杂志;2001年01期

4 ;Inflammatory bowel disease:definition,epidemiology,etiologic aspects,andimmunogenetic studies[J];世界胃肠病学杂志;1998年05期

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1 何雁;王志红;杨善峰;石振旺;李祥;代多珍;;TLR9和NF-κBp65在大鼠溃疡性结肠炎模型结肠组织中的表达[J];安徽医药;2012年07期

2 刘艳丛;刘建平;陈建权;朱叶珊;郎晓猛;;泄浊解毒方对溃疡性结肠炎大鼠T细胞亚群及白介素-10的影响[J];中华中医药杂志;2011年07期

3 陈阿静;李方;杜娟;张燕;宫恩聪;石雪迎;;Crohn病肠黏膜共刺激分子CD86与可诱导共刺激因子的表达及其病理意义[J];北京大学学报(医学版);2009年06期

4 王芸,范红,郭强;不明原因肝功能异常患者中自身抗体和自身免疫性肝病的检测[J];中国医师杂志;2005年11期

5 张果,伦明辉,刘海光,杜丹,关莉莉,宫德正,邹原;禁食降低肠黏膜屏障的形态学观察及对肠道细菌易位的影响[J];大连医科大学学报;2003年01期

6 龙友明,陈垦,兰雷,王晖;大鼠Crohn病模型制备的改进[J];广东医学院学报;2004年01期

7 李海涛;王翼洲;;热瘀散对胃肠湿热型溃疡性结肠炎大鼠MPO的影响[J];甘肃中医;2010年06期

8 孟晓丽,殷国荣;黏膜疫苗及其佐剂的研究进展[J];国外医学(寄生虫病分册);2005年01期

9 刘莉;T细胞亚型在溃疡性结肠炎发病中的研究进展[J];国外医学(消化系疾病分册);2003年03期

10 周毅;邓虹珠;朱学敏;陈静娴;邓静君;曾镇;;苦豆子总碱对大鼠溃疡性结肠炎细胞因子IL-10表达的影响[J];国际消化病杂志;2007年06期

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1 杜海洲;;国际上临床实验研究中的生物技术药品[A];2007年全国生化与生物技术药物学术年会论文集[C];2007年

2 周毅;王赫;梁磊;邓虹珠;;苦豆子总碱对调节性T细胞中的Foxp3在实验性结肠炎发病中表达的影响[A];2006第六届中国药学会学术年会论文集[C];2006年

3 周毅;邓虹珠;邓子华;陈建国;;苦豆子总碱对大鼠实验性结肠炎CD4+CD25+、CD8+CD28-表达的影响[A];2006第六届中国药学会学术年会论文集[C];2006年

4 于海食;洪缨;王玉蓉;陈浩;董世芬;万雪梅;;肠安康新组方结肠定位给药治疗溃疡性结肠炎的适应性研究[A];中国药理学会第十次全国学术会议专刊[C];2009年

5 李振彬;李雪梅;;类风湿关节炎的消化道损害与中药防治研究进展[A];第十一届全国中医风湿病学术研讨会专辑[C];2006年

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1 吴玉泓;久泻灵颗粒剂治疗溃疡性结肠炎的实验及临床研究[D];甘肃农业大学;2010年

2 高永健;黄芪多糖对TNBS诱导大鼠实验性结肠炎的治疗作用及对免疫功能的影响[D];北京协和医学院;2010年

3 卢健;四逆散不同配伍干预实验性溃疡性结肠炎的效用和机制研究[D];辽宁中医药大学;2011年

4 陈炫;溃给宁合剂治疗溃疡性结肠炎的临床研究[D];成都中医药大学;2001年

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6 罗瑞;白术茯苓汤、香连丸及其合方调节克罗恩病大鼠细胞因子与肠黏膜修复的比较研究[D];成都中医药大学;2011年

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8 何林方;不同溃疡性结肠炎分级与病情严重度的关系及其对重症UC诊治的警示研究[D];中南大学;2011年

9 何玉环;溃疡性结肠炎患病及复发危险因素的病例—对照研究[D];新疆医科大学;2011年

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3 贺玉琢;半夏泻心汤对自身免疫性结肠炎模型大鼠的作用及其有效成分[J];国外医学(中医中药分册);2005年03期

4 廖惠芳;廖雪珍;周玖瑶;熊天琴;黄桂英;;补脾益肠胶囊抗结肠炎作用研究[J];中药材;2006年07期

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6 钦丹萍;杨莹莹;邵国民;任永葆;韩建新;;云母颗粒对大鼠乙酸性结肠炎炎症与修复反应的影响[J];浙江中医药大学学报;2007年05期

7 白爱平,沈志祥,于皆平,余保平,罗莺;一氧化氮与结肠炎模型急性期损伤[J];世界华人消化杂志;1999年10期

8 梅俏;于皆平;许建明;项立;;褪黑素对结肠炎大鼠免疫功能的影响[J];世界华人消化杂志;2002年02期

9 叶小青;邓少玲;;芪茶益肠胶囊对大鼠化学性、免疫性结肠炎的影响[J];中国医院药学杂志;2006年08期

10 梁红亮;欧阳钦;;过氧化物酶体增生物激活受体-γ在小鼠噁唑酮结肠炎中作用的研究[J];胃肠病学;2007年02期

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1 孙任任;张馨木;;重组人Elafin在鼠结肠炎中的抗炎作用[A];2010施慧达杯第十届全国青年药学工作者最新科研成果交流会论文集[C];2010年

2 刘莉;梅其炳;刘林娜;王志鹏;刘振国;;大黄多糖治疗结肠炎的机制研究[A];科技、工程与经济社会协调发展——中国科协第五届青年学术年会论文集[C];2004年

3 蒋青伟;钱家鸣;李月;朱峰;;黏膜保护剂对葡聚糖硫酸酯钠诱导的小鼠结肠炎肠道黏膜的保护作用及其机制初探[A];中华医学会第七次全国消化病学术会议论文汇编（下册）[C];2007年

4 唐志鹏;张亚利;;清肠栓对三硝基苯磺酸诱导结肠炎大鼠结肠黏膜地址素细胞黏附分子-1表达的影响[A];中国中西医结合第十九次全国消化病学术会议暨国家级中西医结合消化疾病新进展学习班论文汇编[C];2007年

5 刘辉;潘卫三;聂淑芳;杨星钢;颜廷旭;;布地奈德结肠定位片的结肠炎大鼠药效学评价[A];2009年中国药学大会暨第九届中国药师周论文集[C];2009年

6 陈建章;王小平;范伯曾;刘良福;;锡类散结肠溶胶囊对DSS诱导的小鼠结肠炎治疗作用研究[A];第二十三届全国中西医结合消化系统疾病学术会议暨消化疾病诊治进展学习班论文汇编[C];2011年

7 陈建章;王小平;范伯曾;刘良福;;锡类散结肠溶胶囊对DSS诱导的小鼠结肠炎治疗作用研究[A];全国中西医结合发展战略研讨会暨中国中西医结合学会成立三十周年纪念会论文汇编[C];2011年

8 王旭丹;袁学勤;周勇;徐秋萍;邱泽计;;香连方对TNBS诱导的小鼠结肠炎的影响[A];全国中医药创新与发展研讨会专辑[C];2005年

9 王旭丹;袁学勤;周勇;邱泽计;;四神方对TNBS诱导的小鼠结肠炎的作用及免疫调节机制[A];第三届全国中医药免疫学术研讨会论文汇编[C];2006年

10 刘辉;潘卫三;聂淑芳;杨星钢;颜廷旭;;布地奈德结肠定位片的结肠炎大鼠药效学评价[A];2010年中国药学大会暨第十届中国药师周论文集[C];2010年

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7 胡仁伟;Th细胞、B7分子在DSS小鼠结肠炎发病中的作用研究[D];中国协和医科大学;2001年

8 陈曦;Toll样受体4与β防御素2在结肠炎上皮表达及调控的研究[D];四川大学;2005年

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9 曹霞;中药溃克灵对TNBS结肠炎模型大鼠TGF-β1表达的影响[D];南京中医药大学;2011年

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